[發明專利]一種GPC-3抗體包被磁珠及其制備方法、試劑盒

在審

• 申請號: 202010140100.X
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN111381034A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 華權高;甘華銘;舒芹;來祥兵;郭靜;張雪嬌;趙愿安
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 劉杰

本發明具體涉及一種GPC?3抗體包被磁珠及其制備方法、試劑盒，屬于生物技術領域，該方法包括：將GPC?3抗體配制為質量濃度為8?12mg/mL的溶液，獲得GPC?3抗體溶液；將粒徑為1.5?2.0um與2.0?3.0um的磁性微球按質量比1：3?1：5混合，獲得磁珠溶液；將第一緩沖液與所述磁珠溶液混合，獲得第一混合溶液；將所述GPC?3抗體溶液與所述第一混合溶液按混合，并回旋振蕩15?30min，獲得第二混合溶液；將碳二亞胺配制為質量濃度為5?20mg/mL的溶液，獲得碳二亞胺溶液；將所述第二混合溶液與所述碳二亞胺溶液混合，并回旋振蕩1?2h，獲得第三混合溶液；將封閉液與所述三混合溶液混合，并回旋振蕩15?30min，獲得第四混合溶液；將所述第四混合溶液進行離心處理，離心處理后去除上清液，獲得GPC?3抗體包被磁珠。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體為一種GPC-3抗體包被磁珠及其制備方法、試劑盒。

背景技術

Glypican-3(GPC-3)是Glypican家族中的一員，屬于膜性硫酸乙酰肝素多糖蛋白。在哺乳動物的胚胎期，GPC-3通過影響多個分子信號通路而對組織器官的發育起到重要的調控作用，其功能缺失將導致過度生長和畸變綜合征(SGBS)。成人GPC-3的異常表達與多種腫瘤的發生發展關系密切。GPC-3在肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中表達上調，與HCC的生物學特性相關，在肝癌的早期診斷、生物治療和預后評估中具有良好的應用前景。

肝細胞癌簡稱肝癌，是全球最常見的惡性腫瘤之一。根據世界衛生組織報告顯示，我國肝癌的發病率為25.7/10萬，居全球之首，每年新發和死亡患者占全球總數的一半。盡管HCC的治療水平有了極大提高，但死亡率并無明顯改善，5年以上生存率僅為10％左右，其主要原因是肝癌起病隱匿，早期沒有癥狀或癥狀不明顯，又缺乏有效的早期診斷手段，患者就診時通常已經達到晚期，失去了最佳治療的機會。因此，早期發現癌變并有效治療是提高HCC生存期的關鍵。

甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)及其異質體是目前臨床上診斷HCC重要指標和特異性較強的腫瘤標志物，然而在多項研究及實踐工作中均發現，AFP在一些良性肝病、生殖性畸胎瘤、肺癌、妊娠活動期等患者中也可出現升高，臨床上大概有30％～40％的HCC患者AFP為陰性，所以存在一定的誤診率和漏診率。2010版美國肝病研究學會指南已不再將AFP作為篩查指標。

研究表明約80％的HCC特異地表達GPC-3，肝癌組織中GPC-3陽性患者，其血液中同樣可檢測到GPC-3，這是由于GPC-3易受細胞的蛋白轉換酶水解作用，形成游離sGPC-3進入循環系統。因此，血清中sGPC-3水平間接反映著成人機體內GPC-3陽性肝癌細胞數量水平；約有83％HCC患者血清可檢測到高水平GPC-3，而肝硬化患者血清GPC-3陽性率僅為9.38％且呈低水平。這些研究結果提示血清sGPC-3含量將可能作為早期篩查、診斷HCC的依據，并以此監測患者的預后狀況。我國，約30％的HCC患者血清AFP為陰性，研究發現GPC-3在血清AFP陰性HCC患者中卻有很高檢出率。GPC-3對于診斷HCC有較高的特異性，在一定程度上可以彌補AFP的特異性不足，因此，聯合檢測可顯著提高HCC檢出率。

雖然GPC-3有明確的臨床診斷價值，但是目前GPC-3的檢測多依賴傳統的酶聯免疫檢測分析方法，該方法對人工依賴程度較高，人為影響因素對檢測結果的準確定、特異性以及批間差影響較大，因此需要開發基于自動化的檢測的反應體系，以滿足臨床檢測的需求，一方面可以保證檢測結果的準確性和重現性，另一方面可以降低對技術人員的依賴。此外，專利申請文件CN105759051A一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒及其制備方法，公開了一種檢測GPC-3的試劑盒，但是該試劑盒以雙氧水作為反映底物，雙氧水本身的穩定性相對較差，對檢測結果有一定的不良影響，因此，需要開發一種自動、快速、準確的GPC-3檢測試劑盒來滿足檢測需求。

發明內容