[發明專利]一種GPC-3抗體包被磁珠及其制備方法、試劑盒

在審

• 申請號: 202010140100.X
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN111381034A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 華權高;甘華銘;舒芹;來祥兵;郭靜;張雪嬌;趙愿安
• 申請（專利權）人: 武漢生之源生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 劉杰

1.一種GPC-3抗體包被磁珠的制備方法，其特征在于，包括：

將GPC-3抗體配制為質量濃度為8-12mg/mL的溶液，獲得GPC-3抗體溶液；

將粒徑為1.5-2.0um與2.0-3.0um的磁性微球按質量比1：3-1：5混合，獲得磁珠溶液；

將第一緩沖液與所述磁珠溶液按體積比1：1-1:2混合，獲得第一混合溶液；

將所述GPC-3抗體溶液與所述第一混合溶液按體積比1:2-1:3混合，并回旋振蕩15-30min，獲得第二混合溶液；

將所述活化劑與所述第二混合溶液按體積比1：3-1:4混合，并回旋振蕩1-2h，獲得第三混合溶液；

將封閉液與所述第三混合溶液按體積比1：4-1:5混合，并回旋振蕩15-30min，獲得第四混合溶液；

將所述第四混合溶液進行離心處理，離心處理后去除上清液，獲得GPC-3抗體包被磁珠。

2.根據權利要求1所述的一種GPC-3抗體包被磁珠的制備方法，其特征在于，所述第一緩沖液包括如下一種：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、醇醚磺基琥珀酸單酯二鈉鹽MES緩沖溶液、磷酸鹽緩沖液、Tris–鹽酸緩沖液，優選地，所述封閉液包括如下至少一種：PEG20000、BSA、酪蛋白。

3.根據權利要求1所述的一種GPC-3抗體包被磁珠的制備方法，其特征在于，所述活化劑為質量濃度5-20mg/mL的碳二亞胺溶液EDAC。

4.根據權利要求1所述的一種GPC-3抗體包被磁珠的制備方法，其特征在于，所述將所述第四混合溶液進行離心處理，離心處理后去除上清液，獲得GPC-3抗體包被磁珠，包括：

將所述第四混合溶液在轉速為12000-16000rpm條件下離心處理10-30min，離心處理后去除上清液；

用第二緩沖液重懸去除上清液后的第四混合溶液；

重復所述離心處理和所述重懸2-3次，以去除GPC-3抗體包被磁珠中的雜質，獲得GPC-3抗體包被磁珠。

5.一種GPC-3抗體包被磁珠，其特征在于，由如權利要求1-4任一項所述的一種GPC-3抗體包被磁珠的制備方法制備得到。

6.一種GPC-3抗體包被磁珠試劑盒，其特征在于，包括如權利要求5所述的一種GPC-3抗體包被磁珠，其中，將所述GPC-3抗體包被磁珠與防凝液混合，以減少磁珠凝集。

7.根據權利要求6所述的一種GPC-3抗體包被磁珠試劑盒，其特征在于，還包括堿性磷酸酶標記GPC-3抗體、化學發光底物溶液和洗滌劑。

8.根據權利要求7所述的一種GPC-3抗體包被磁珠試劑盒，其特征在于，所述堿性磷酸酶標記GPC-3抗體的制備方法如下：

將摩爾濃度為10-100mmol/L的3-嗎啉丙磺酸,摩爾濃度為1-5mmol/L的乙二胺四乙酸和pH值為6.5-7.5的緩沖液混合，獲得第一稀釋液；

將GPC-3抗體通過所述第一稀釋液稀釋至質量濃度為1-2mg/mL，并加入10-50uL且摩爾濃度為100-500mmol/L的2-MEA，于25-30℃反應30-60min或者于3-5℃反應1-2h后，進行脫鹽處理，獲得脫鹽GPC-3抗體；

將摩爾濃度為10-100mmol/L的3-嗎啉丙磺酸,摩爾濃度為1-5mmol/L的乙二胺四乙酸和pH值為7.5-8.5緩沖液混合，獲得第二稀釋液；

將堿性磷酸酶通過所述第二稀釋液稀釋至質量濃度為2-5mg/mL，并加入10-30uL且摩爾濃度為100-250mmol/L的SM(PEG)6，于25-30℃反應30-60min或者于3-5℃反應1-2h后，進行脫鹽處理，獲得脫鹽堿性磷酸酶；

將所述脫鹽GPC-3抗體和所述脫鹽堿性磷酸酶以體積比1:1或者2:1混合，于25-30℃反應30-60min或者于3-5℃反應1-2h，獲得堿性磷酸酶標記GPC-3抗體。