[發(fā)明專利]一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010139530.X | 申請日： | 2020-03-03 |
| 公開（公告）號： | CN111235243A | 公開（公告）日： | 2020-06-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 田慶常;曹曉環(huán);羅汝婳;劉蒙蒙 | 申請（專利權(quán)）人： | 杭州師范大學 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213 | 代理人： | 沈淵琪 |
| 地址： | 311121 浙江省杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 腫瘤 特異性 外泌體 胞外囊泡 定量 方法 | ||
1.一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）構(gòu)建抗體-DNA復合體；
（2）從樣品中分離純化得到總外泌體/胞外囊泡，采用步驟（1）所述抗體-DNA復合物標記腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡；
（3）對經(jīng)步驟（2）標記的腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡進行QPCR定量檢測。
2.如權(quán)利要求1所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述步驟（1）中構(gòu)建的方法為：抗體和DNA分別生物素化處理后，將生物素化抗體和生物素化DNA混合，再加入鏈霉親和素分子混合反應(yīng)，或者將生物素化抗體和鏈霉親和素分子混合，再加入生物素化DNA混合反應(yīng)，得到抗體-DNA復合體。
3.如權(quán)利要求2所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述生物素化抗體為根據(jù)檢測腫瘤抗原的不同所選用的偶聯(lián)生物素的抗體；所述生物素化DNA為一端帶有生物素的DNA模板，其長度為10-1000 核苷酸，優(yōu)選長度為20-100 核苷酸。
4.如權(quán)利要求2所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述生物素化抗體與鏈霉親和素的分子數(shù)量比例為：1:4-1:1000，優(yōu)選1:10-1:50，所述鏈霉親和素與生物素化DNA的分子數(shù)量比例小于1:4。
5.如權(quán)利要求2所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述生物素化抗體和生物素化DNA混合時間為2-10min，所述再加入鏈霉親和素分子混合反應(yīng)時間為5min-10h，優(yōu)選為10min-90min，所述生物素化抗體和鏈霉親和素分子混合時間為10-60min，所述再加入生物素化DNA混合反應(yīng)時間為10-60min。
6.如權(quán)利要求1或2所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于每分子所述抗體-DNA復合體中含有一個生物素化抗體和三個生物素化DNA。
7.如權(quán)利要求1或2所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述步驟（2）中樣品包括血漿、血清、尿液、腦脊液和唾液。
8.如權(quán)利要求1所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述步驟（2）中標記方法為：將抗體-DNA復合體與外泌體/胞外囊泡混合孵育。
9.如權(quán)利要求8所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述孵育條件為溫度4℃-30℃，反應(yīng)時間10min-12h，優(yōu)選條件為溫度25℃，反應(yīng)時間2 h。
10.如權(quán)利要求1所述的一種腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的定量方法，其特征在于所述步驟（3）中QPCR定量檢測方法為：QPCR定量檢測腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡表面的抗體-DNA復合物中DNA的分子數(shù)量，進而計算得到腫瘤特異性外泌體/胞外囊泡的含量。
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