[發明專利]一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑及制備方法

有效

• 申請號: 202010138129.4
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN111308092B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 梅義武;劉興;葉佳穎
• 申請（專利權）人: 浙江卓運生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 杭州斯可睿專利事務所有限公司 33241
• 代理人: 唐迅

本發明公開了一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑及制備方法，包括采用納米金顆粒，在納米金顆粒中加入水溶性光敏劑，得到納米金?光敏劑復合物，然后再將納米金?光敏劑復合物再與肌紅蛋白單克隆抗體進行偶聯，通過納米金顆粒所具有的電荷性將肌紅蛋白單克隆抗體在其等電點環境條件下使兩者產生靜電吸附，從而使肌紅蛋白單克隆抗體偶聯至納米金顆粒表面。按本發明的制備方法得到的一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑，提高了光敏劑的利用率，簡化生產工藝，降低生產成本，使用時采用夾心法檢測原理對檢測物進行檢測，提高了照射的有效光劑量，使得更多的光敏劑被激活并產生更強的光敏效果，且使激發光波長與發射波長的差距加大，提高檢測的辨識度。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑及制備方法。

背景技術

抹香鯨肌紅蛋白三級結構于1960年由Kendrew用X線衍射法闡明，這是世界上第一個被描述的蛋白質三級結構。肌紅蛋白(MYO)是一種細胞內結合氧血紅素蛋白，普遍存在于心肌和骨骼肌中，分子量為17,800道爾頓。在急性心肌損傷時，MYO最先被釋放入血液中，在癥狀出現約2-3小時后，血中MYO可超出正常上限，9-12小時達到峰值，24-36小時后恢復正常。因此，測定血清或血漿肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標，具有良好的臨床診斷價值，可用于評估潛在的急性心肌梗塞病癥，并輔助診斷急性心肌梗塞，還可用于再梗死的診斷，結合臨床，如MYO重新升高，應考慮為再梗死或者梗死延展。

對于肌紅蛋白的檢測法，現有光激化學發光方法需采用非水溶性光敏劑(卟啉、葉綠素和酞菁及其衍生物等)，未經修飾的光敏劑的單線態氧量子產率較低，影響檢測性能；而衍生化的光敏劑，化學合成困難、工藝復雜。

現有光激發光系統使用的光敏劑需在有機相中包埋入聚苯乙烯微球，需要經過復雜的離心、超濾等純化方式，且需再恢復到水相基質中，光敏劑在包埋、純化等處理過程中易產生損耗，降低感光效應。

現有光激化學發光技術激發波長與檢測波長差異不大，易受干擾，熒光背景影響較大。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述現有技術的不足而提供的一種增強檢測精密度、準確度和靈敏度且不易受激發光的干擾的均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑及制備方法。

為了實現上述目的，本發明所設計的一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑，它包含有光敏劑成份，它是一種納米金-光敏劑復合物與肌紅蛋白單克隆抗體進行偶聯體。

本發明所設計的一種均相法肌紅蛋白化學發光檢測試劑的制備方法，包括采用納米金顆粒，獲得納米金顆粒后進行納米金-光敏劑復合，所述納米金-光敏劑的復合是在納米金顆粒中加入水溶性光敏劑，并在室溫下暗室中攪拌過夜，然后通過離心最后得到沉淀的納米金-光敏劑復合物，然后再用緩沖液將納米金-光敏劑復合物復溶；復溶后的納米金-光敏劑復合物再與肌紅蛋白單克隆抗體進行偶聯，所述納米金-光敏劑與肌紅蛋白單克隆抗體的偶聯是在復溶后的納米金-光敏劑復合物的溶液中加入肌紅蛋白單克隆抗體，調整反應pH值至肌紅蛋白單克隆抗體的等電點(通常為等電點值的正負0.5之間)，通過納米金顆粒所具有的電荷性將肌紅蛋白單克隆抗體在其等電點環境條件下使兩者產生靜電吸附，從而使肌紅蛋白單克隆抗體偶聯至納米金顆粒表面，再通過離心方式除去未結合的肌紅蛋白單克隆抗體，然后再加入復溶緩沖液進行復溶，獲得懸浮于復溶緩沖液中的納米金-光敏劑復合物與肌紅蛋白單克隆抗體進行偶聯體。

本發明所提供的納米金-光敏劑復合物，使光敏劑利用率更高，檢測靈敏度更高。

為了使納米金顆粒與光敏劑能夠獲得良好的復合以及納米金-光敏劑復合物與肌紅蛋白單克隆抗體具有更好的偶聯效果，所述納米金顆粒與光敏劑的摩爾比可以是2:1-10，所述水溶性光敏劑可以是卟啉衍生物、酞菁衍生物或葉綠素衍生物，如銅酞菁-3,4',4″,4″′-四磺酸四鈉鹽或葉綠素銅鈉鹽，所述的靜電吸附時間可以是1小時至2小時。