[發(fā)明專利]一種樹鼩脈絡(luò)膜新生血管動(dòng)物模型的構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010137681.1
• 申請(qǐng)日: 2020-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN111226865A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳敏;代解杰;劉曉晨;罕圓圓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省第二人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A01K67/02
• 分類號(hào): A01K67/02
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 于洪;陳左

本發(fā)明涉及一種樹鼩脈絡(luò)膜新生血管動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，屬于動(dòng)物模型建立技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明系統(tǒng)的應(yīng)用單點(diǎn)激光法誘導(dǎo)構(gòu)建樹鼩脈絡(luò)膜新生血管動(dòng)物模型，可以實(shí)現(xiàn)樹鼩CNV模型的成功誘導(dǎo)，且誘導(dǎo)出的CNV病灶從形態(tài)學(xué)、功能、血管生成相關(guān)促進(jìn)、抑制因子變化趨勢等方面均與人類疾病高度相似，模型誘導(dǎo)的時(shí)間從其他靈長類模型誘導(dǎo)的4周顯著縮短為1周，填補(bǔ)了目前沒有針對(duì)樹鼩這一物種特定的CNV動(dòng)物模型的空白，提高了建模的成功率。此外，本發(fā)明提供的觀察分析方法簡單，價(jià)格低廉，可以系統(tǒng)、動(dòng)態(tài)觀察分析CNV形成的過程和效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物模型建立技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種樹鼩脈絡(luò)膜新生血管動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是由多種病因所致的脈絡(luò)膜新生血管芽穿越Bruch膜受損處，并在視網(wǎng)膜色素上皮(Retinal pigmentepithelium,RPE)下方生長，逐漸穿過RPE向視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層延伸，增殖形成纖維血管組織。CNV常發(fā)生于黃斑區(qū)，引發(fā)黃斑區(qū)出血、視網(wǎng)膜下的漿液性滲出，為年齡相關(guān)性黃斑變性、高度近視黃斑病變、中心性滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變等多種眼底疾病的共同特征，嚴(yán)重影響患者的中心視力。眼底熒光血管造影(Fundus Fluorescein Angiography，F(xiàn)FA)和脈絡(luò)膜血管造影(Indocyanine green angiography,ICGA)主要表現(xiàn)為新生血管的滲漏，伴有周圍的出血、滲出，晚期引起脈絡(luò)膜纖維化和視網(wǎng)膜瘢痕形成。引起的CNV相關(guān)疾病已經(jīng)成為全球主要的致盲原因之一，在西方發(fā)達(dá)國家已經(jīng)成為老年人的主要致盲性眼病，在我國的患病率也在不斷上升。CNV形成的具體發(fā)病機(jī)制不清，目前認(rèn)為可能與以下因素有關(guān)：1)長期氧化應(yīng)激損傷及炎癥反應(yīng)，激活巨噬細(xì)胞(macrophages,MPs)、中性粒細(xì)胞等炎細(xì)胞聚集，以及小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，通過蛋白水解作用破壞了Bruch膜；2)炎癥因子的釋放及促血管生成因子和抗血管生成因子的平衡失調(diào)，引起病灶局部的微環(huán)境改變，促進(jìn)了CNV的發(fā)生。但目前對(duì)CNV的具體發(fā)病機(jī)制，尤其是CNV發(fā)生相關(guān)的基因調(diào)控，仍有待進(jìn)一步大量研究。

國內(nèi)外的主要CNV建模方法包括激光誘導(dǎo)、生長因子誘導(dǎo)等。1981年，Archer等提出CNV形成的兩個(gè)主要因素包括：Bruch膜的破裂和外層視網(wǎng)膜細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分的改變。在此理論基礎(chǔ)上，Archer等成功利用激光光凝造成恒河猴視網(wǎng)膜內(nèi)層血供減少和Bruch膜破裂，誘發(fā)CNV模型。氪激光誘導(dǎo)CNV的作用機(jī)制是用激光選擇性破壞光感受器外界、RPE細(xì)胞、Bruch膜和脈絡(luò)膜毛細(xì)血管，Bruch膜破壞后引發(fā)的一系列損傷修復(fù)過程，繼而形成新生血管。其病理基礎(chǔ)與人類CNV相同，即Bruch膜-視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體損傷導(dǎo)致血管生成因子與抑制因子間平衡的破壞，使內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增生、移行和管腔形成等一系列新生血管形成過程，與其他誘導(dǎo)方式相比，激光誘導(dǎo)所產(chǎn)生的病理變化與人類自然病程更為相近。

目前，CNV模型常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有猴、兔、鼠和豬。猴CNV模型的組織學(xué)病理及眼FFA/ICGA改變與人類疾病改變非常相似，實(shí)驗(yàn)性猴CNV模型中，CNV一般發(fā)生于光凝后4周，持續(xù)2-52周，雖然這種模型表現(xiàn)與人類極其相似，但動(dòng)物來源有限，費(fèi)用高昂，CNV誘發(fā)時(shí)間較長，發(fā)生率低等缺陷限制了其運(yùn)用。而其他動(dòng)物視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)與人類差異較大，CNV形成后不具備人類疾病的典型特征，并非理想的模型動(dòng)物。亟需開發(fā)一種更理想的CNV實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。

樹鼩作為一種新型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，近年來在生物醫(yī)學(xué)研究中其應(yīng)用范圍越來越廣，在人類疾病動(dòng)物模型方面，樹鼩開始得到應(yīng)用，包括乳腺癌、乙肝、皰疹病毒感染、登革熱病毒、HIV、糖尿病和神經(jīng)系統(tǒng)等。由于樹鼩具有很好的色覺、較高的辨色準(zhǔn)確率，對(duì)光暗度很敏感，視覺系統(tǒng)比鼠、兔等動(dòng)物更加發(fā)達(dá)，近年來很多研究應(yīng)用于人類的近視和視覺發(fā)育研究。其視網(wǎng)膜以視錐細(xì)胞為主，感光度變化很敏感，這與人類的黃斑區(qū)功能很類似。樹鼩的獨(dú)特的視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)為模擬人類黃斑區(qū)CNV的疾病過程提供了良好基礎(chǔ)。但目前為止，還沒有在樹鼩上建立脈絡(luò)膜新生血管動(dòng)物模型的研究。

發(fā)明內(nèi)容