[發明專利]檢測冠狀病毒并分型的組合物、試劑盒、方法及其用途

有效

• 申請號: 202010136909.5
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN110982942B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 戴立忠;譚德勇;鄧中平;紀博知;劉佳;程星;孫青芝;顏進;毛君杰
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 黃景輝;張穎玲

本發明涉及分子生物學檢測領域，更具體的，涉及冠狀病毒的檢測領域，本發明提供了一種組合物，其能夠檢測新型冠狀病毒2019?nCoV、冠狀病毒229E、冠狀病毒NL63、冠狀病毒OC43、冠狀病毒HKU1、冠狀病毒MERSr?CoV、冠狀病毒SARSr?CoV并分型；與此同時，還提供了包含所述組合物的試劑盒，所述組合物的用途，以及用于檢測冠狀病毒并分型的方法。本發明的組合物結合熒光探針法和熔解曲線法，能夠在一管同時檢測七個冠狀病毒并進行分型，其成本低，通量高，耗時少，極大的提升了檢測效率，并且操作簡便，單管操作避免由于樣本間交叉引起的假陽性和環境污染。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，更具體地，屬于冠狀病毒的檢測領域，更具體地，本發明能夠檢測新型冠狀病毒2019-nCoV、冠狀病毒229E、冠狀病毒NL63、冠狀病毒OC43、冠狀病毒HKU1、冠狀病毒MERSr-CoV、冠狀病毒SARSr-CoV并分型。

背景技術

冠狀病毒為不分節段的單股正鏈RNA病毒，屬于巢病毒目（Nidovirales）冠狀病毒科（Coronaviridae）正冠狀病毒亞科（Orthocoronavirinae），根據血清型和基因組特點冠狀病毒亞科被分為α、β、γ和δ四個屬，可以感染許多動物物種，包括人、蝙蝠、狗、豬、老鼠、鳥、牛、鯨、馬、山羊、猴子等。已知感染人的冠狀病毒有6種，包括α屬的229E和NL63，β屬的OC43和HKU1、中東呼吸綜合征相關冠狀病毒（MERSr-CoV）和嚴重急性呼吸綜合征相關冠狀病毒（SARSr-CoV）。2019年12月以來，湖北省武漢市發生不明原因肺炎感染事件，從患者下呼吸道分離出一種屬于β屬的新型冠狀病毒。隨后，世界衛生組織將其命名為“2019新型冠狀病毒（2019-nCoV）”。

新型冠狀病毒屬于β屬的新型冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，常為多形性，直徑60-140nm。其基因特征與SARSr-CoV和MERSr-CoV有明顯區別。根據武漢病毒所石正麗研究員最新研究成果發現，2019-nCoV與其實驗室之前從中華菊頭蝠中分離到的一個蝙蝠冠狀病毒毒株RaTG13相似度非常高，整體基因組相似度達96.2%。另外，研究顯示2019-nCoV與蝙蝠SARS樣冠狀病毒（bat-SL-CoVZC45和bat-SL-CoVZXC21）同源性也達85%以上。

在可以感染人的7種冠狀病毒中，冠狀病毒229E、冠狀病毒NL63、冠狀病毒OC43、冠狀病毒HKU1為常見的呼吸道感染病毒，感染人后病癥較輕，一般不會引起重癥，但如果是新型冠狀病毒2019-nCoV、冠狀病毒MERSr-CoV、冠狀病毒SARSr-CoV感染，則患者感染癥狀就非常嚴重，且極易產生重癥。如果能夠在一次測試中就對各種冠狀病毒進行明確的分型，將會極大方便后續的診療措施，做到精準治療和防控，尤其針對傳染性和危害性大的新型冠狀病毒2019-nCoV、冠狀病毒MERSr-CoV、冠狀病毒SARSr-CoV，可以做到及時控制傳染源，阻斷病毒大流行和大爆發。

因此，本領域需求同時并快速鑒定多個冠狀病毒并分型的相關產品。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種能夠檢測冠狀病毒并分型的組合物，所述組合物包括：

第一組：

如SEQ ID NO:1所示的新型冠狀病毒2019-nCoV上游引物、如SEQ ID NO:2所示的新型冠狀病毒2019-nCoV下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的新型冠狀病毒2019-nCoV探針；

如SEQ ID NO:4所示的冠狀病毒NL63上游引物、如SEQ ID NO:5所示的冠狀病毒NL63下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的冠狀病毒NL63探針；

如SEQ ID NO:7所示的冠狀病毒HKU1上游引物、如SEQ ID NO:8所示的冠狀病毒HKU1下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的冠狀病毒HKU1探針；

第二組：