[發明專利]檢測冠狀病毒并分型的組合物、試劑盒、方法及其用途

有效

• 申請號: 202010136909.5
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN110982942B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 戴立忠;譚德勇;鄧中平;紀博知;劉佳;程星;孫青芝;顏進;毛君杰
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 黃景輝;張穎玲

1.一種能夠檢測冠狀病毒并分型的組合物，所述組合物包括：

用于熒光探針法的第一組：

如SEQ ID NO:1所示的新型冠狀病毒2019-nCoV上游引物、如SEQ ID NO:2所示的新型冠狀病毒2019-nCoV下游引物，和如SEQ ID NO:3所示的新型冠狀病毒2019-nCoV探針；

如SEQ ID NO:4所示的冠狀病毒NL63上游引物、如SEQ ID NO:5所示的冠狀病毒NL63下游引物，和如SEQ ID NO:6所示的冠狀病毒NL63探針；和

如SEQ ID NO:7所示的冠狀病毒HKU1上游引物、如SEQ ID NO:8所示的冠狀病毒HKU1下游引物，和如SEQ ID NO:9所示的冠狀病毒HKU1探針；以及

用于熔解曲線法的第二組：

如SEQ ID NO:10所示的冠狀病毒229E上游引物和如SEQ ID NO:11所示的冠狀病毒229E下游引物；

如SEQ ID NO:12所示的冠狀病毒OC43上游引物和如SEQ ID NO:13所示的冠狀病毒OC43下游引物；

如SEQ ID NO:14所示的冠狀病毒MERSr-CoV上游引物和如SEQ ID NO:15所示的冠狀病毒MERSr-CoV下游引物；和

如SEQ ID NO:16所示的冠狀病毒SARSr-CoV上游引物和如SEQ ID NO:17所示的冠狀病毒SARSr-CoV下游引物；

其中，第一組內的熒光報告基團彼此互不相同，并且第二組內的熒光報告基團彼此互不相同。

2.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述組合物進一步包括如SEQ ID NO:18所示的內標上游引物、如SEQ ID NO:19所示的內標下游引物，和如SEQ ID NO:20所示的內標探針。

3.根據權利要求1所述的組合物，其中，SEQ ID NO:3所示的新型冠狀病毒2019-nCoV探針的熒光報告基團為FAM；如SEQ ID NO: 6所示的冠狀病毒NL63探針的熒光報告基團為HEX；如SEQ ID NO:9所示的冠狀病毒HKU1探針的熒光報告基團為ROX。

4.根據權利要求1所述的組合物，其中，如SEQ ID NO:10所示的冠狀病毒229E上游引物的熒光報告基團為FAM；如SEQ ID NO:12所示的冠狀病毒OC43上游引物的熒光報告基團為HEX；如SEQ ID NO:14所示的冠狀病毒MERSr-CoV上游引物的熒光報告基團為ROX；如SEQ IDNO:16所示的冠狀病毒SARSr-CoV的熒光報告基團為CY5。

5.權利要求1~4中任一項所述的組合物在制備檢測冠狀病毒并分型的試劑盒中的用途。

6.一種用于檢測冠狀病毒并分型的試劑盒，所述試劑盒包括權利要求1~4中任一項所述的組合物。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括核酸釋放試劑、dNTP、逆轉錄酶、DNA聚合酶、PCR緩沖液中的至少一種。

8.根據權利要求6所述的試劑盒，其中，所述組合物中引物的用量為50~150nM；所述組合物中探針的用量為25~75nM。

9.一種用于非診斷目的的檢測冠狀病毒并分型的方法，所述方法包括以下步驟：

1）釋放待測樣本的核酸；

2）使用如權利要求1~4中任一項所述的組合物對步驟1）獲得的核酸進行熒光定量PCR；

3）獲得并分析結果。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，所述熒光定量PCR的反應條件為：

逆轉錄，溫度為50℃，時間25~35分鐘，1次循環；預變性，溫度為94℃，時間2~10分鐘，1次循環；變性，溫度為94℃，時間為10~20秒，退火，溫度為60℃，時間為20~40秒，45~50次循環；熔解曲線分析，溫度為50℃~95℃，每上升0.5℃采集一次熒光，1次循環。