[發(fā)明專(zhuān)利]一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定防己黃芪湯中十九種成分含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010133222.6
• 申請(qǐng)日: 2020-03-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111272934A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李?lèi)?ài)平;楊柳;秦雪梅;張麗增
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 太原晉科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 翟沖燕

1.一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定防己黃芪湯中十九種成分含量的方法，其特征在于：具體步驟如下：

（1）供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取防己黃芪湯凍干粉末35mg、300mg各一份分別于離心管中，分別加入甲醇1mL，渦旋1min混勻，控制超聲溫度30℃，頻率30KHz超聲處理30min，13000r/min的條件下離心15min，取上清，即得供試品溶液1 號(hào)和2號(hào)，分別用于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜正、負(fù)離子模式分析；

（2）對(duì)照品溶液的制備：取芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、紫檀烷、紫檀烷苷、異黃烷、甘草素、甘草苷、甘草次酸、粉防己堿、防己諾啉堿、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯ⅡⅠ、異黃烷苷、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ和黃芪皂苷Ⅳ對(duì)照品精密稱(chēng)定，分別置5mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成濃度分別為0.624mg/mL、0.576mg/mL、0.432mg/mL、0.683mg/mL、0.462mg/mL、0.326mg/mL、0.722mg/mL、0.428mg/mL、0886mg/mL、0.550mg/mL、0.438mg/mL、0.440mg/mL、0.434mg/mL、0.642mg/mL、0.580mg/mL、1.100mg/mL、0.980mg/mL、0.500mg/mL和0.600mg/mL的對(duì)照品溶液；

（3）混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：分別吸取適量體積的十九種成分的對(duì)照品溶液于兩個(gè)5mL容量瓶中，定容，得到白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯ⅡⅠ、甘草素、芒柄花素、毛蕊異黃酮、紫檀烷、異黃烷、甘草苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮苷、紫檀烷苷、粉防己堿和防己諾啉堿組成的終濃度為15.19μg/mL、30.49μg/mL、21.4μg/mL、6.48μg/mL、10.26μg/mL、4.62μg/mL、9.025μg/mL、151.3μg/mL、54.6μg/mL、59.76μg/mL、29.34μg/mL、82.12μg/mL和82.5μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液A；異黃烷苷、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ、黃芪皂苷Ⅳ和甘草次酸組成的終濃度為23.2μg/mL、198.00μg/mL、137.2μg/mL、40μg/ml、18μg/ml和16.5μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液B；

(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液A稀釋至終濃度為100％、 75％、 50％、 30％、10％、 2％的系列濃度，將混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液B稀釋至終濃度為60%、40%、20%、7%、5%、2%的系列濃度；采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，其中混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液A在正離子模式下分析，混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液B在負(fù)離子模式下分析，并分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(5)取步驟(1)配置的1號(hào)和2號(hào)供試品溶液，采用步驟(4)中所述液相色譜條件和質(zhì)譜條件，進(jìn)行質(zhì)譜正、負(fù)離子模式分析，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即得到供試品防己黃芪湯中十九種成分含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定防己黃芪湯中十九種成分含量的方法，其特征在于：所述液相色譜條件：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3液相色譜柱，規(guī)格：2.1mm×100mm，1 .8μm；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈和0.1％甲酸水溶液；分析時(shí)間正離子為23min；負(fù)離子為17min；

所述質(zhì)譜條件：采用MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式、ESI離子源，離子源溫度400℃，質(zhì)量范圍：M/Z50-1500，噴霧電壓：3 .5千伏(+)、3 .5千伏(－)，鞘氣體體積：35，輔助體積：10，毛細(xì)管溫度：320℃，透鏡電壓：55千帕，質(zhì)量分辨率：70000。