[發(fā)明專利]一種用于治療支氣管胸膜瘺的可注射水凝膠

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010131796.X
• 申請日: 2020-02-29
• 公開（公告）號: CN111317869B
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾奕明;蘇伯馬尼·肯達(dá)薩米
• 申請（專利權(quán)）人: 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院
• 主分類號: A61L31/14
• 分類號: A61L31/14;A61L31/16;A61L31/04;C07K14/435;C07K1/14
• 代理公司: 泉州華昊知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35240
• 代理人: 林曉玲

1.一種用于治療支氣管胸膜瘺的可注射水凝膠，其特征在于：其合成方法包括以下步驟：

A、維生素K3-肌肽(VKCP)的合成：分別取甲萘醌和硫代乳酸置于雙頸圓底燒瓶中，然后加入甲醇，在冰浴條件下進行巰基-邁克爾加成反應(yīng)2小時，并在室溫下過夜，從而得到新的硫代甲萘醌，對該粗品進行重結(jié)晶，隨后，在水作為溶劑的情況下，利用EDC/NHS交聯(lián)劑0-10℃過夜，使硫代甲萘醌與左旋肌肽反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)混合物在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮以去除溶劑，用乙酸乙酯和水進行處理，用正己烷多次洗滌得到粗樣品，最后將該樣品制成凍干劑型，就是維生素K3-肌肽(VKCP)；

B、從家蠶中提取絲素蛋白：將從家蠶中獲得的蠶蛹和絲膠在0.02M純堿中煮沸30min后，用超純水多次漂洗，所得的絲線干燥過夜，隨后，將10g絲線溶解9.3M溴化鋰溶液中60℃過夜，從而得到絲素蛋白溶液，然后用去離子水對絲素蛋白溶液透析2天，所得的溶液4℃環(huán)境下儲存以供下一步使用；

C、蛋殼膜的制備：收集新鮮破碎的蛋殼膜，用純冷水洗凈，將洗凈后的蛋殼膜在70％體積比的醋酸中溶解2天，隨后在90℃，存在10％體積比的醋酸條件下，將該溶液轉(zhuǎn)移至3-巰基丙酸(3-MPA)水溶液中，反應(yīng)4小時后，所制備的蛋殼膜溶液貯存?zhèn)溆茫?/p>

D、維生素K3-肌肽共軛纖維蛋白水凝膠(VCFP)的制備：在制備好的15ml蛋殼膜和絲素蛋白溶液中加入VKCP，將該混合溶液超聲震蕩15分鐘，隨后，加入2mmol/ml多巴胺和1.5mmol/mlEDC/NHS并再次超聲震蕩30分鐘，將反應(yīng)后的混合物在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)結(jié)束后，將所獲得的水凝膠混合物以12000rpm離心10min，并用超純水洗滌3-4次，將該樣品制成凍干粉，最后所得的為維生素K3-肌肽共軛纖維蛋白水凝膠(VCFP)于室溫下保存；

E、干細(xì)胞負(fù)載制備成SVCFP：將干細(xì)胞用0.2％胰蛋白酶消化，離心后在培養(yǎng)基中重新懸浮，然后再次離心，將上一步驟制備的VCFP以適當(dāng)濃度加入干細(xì)胞中，并將兩者混合，通過對該水凝膠的粘度和可注射情況進行檢測從而得到SVCFP。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療支氣管胸膜瘺的可注射水凝膠，其特征在于：所述步驟A中，甲萘醌和硫代乳酸均為1mmol，重結(jié)晶方式為：采用薄層色譜法，以乙酸乙酯和石油醚兩者按10：90配比為展開劑，觀察反應(yīng)的完成，EDC/NHS為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺。