[發(fā)明專利]一種離子液體對(duì)糖代謝影響的評(píng)估方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010129284.X
• 申請(qǐng)日: 2020-02-28
• 公開（公告）號(hào): CN111235208B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周磊;薛永來;崔雯;何錦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/02
• 分類號(hào): C12Q1/02
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本發(fā)明涉及環(huán)境毒理學(xué)模型領(lǐng)域，具體涉及一種離子液體對(duì)糖代謝影響的評(píng)估方法。本發(fā)明以HepG2細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，離子液體1?丁基?3?甲基咪唑氯鹽對(duì)其進(jìn)行多次暴露處理后對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行糖原含量、糖代謝相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，提供了一種操作簡(jiǎn)便、周期性短的離子液體對(duì)糖代謝毒性評(píng)估方法。本發(fā)明對(duì)糖代謝各個(gè)關(guān)鍵階段中相關(guān)限速酶所對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行檢測(cè)具有全面性和普遍性。本發(fā)明所提供的評(píng)估方法能夠全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)離子液體的糖代謝毒性水平，為生態(tài)環(huán)境污染物標(biāo)準(zhǔn)的確定提供依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及環(huán)境毒理學(xué)模型領(lǐng)域，具體涉及一種離子液體對(duì)糖代謝影響的評(píng)估方法。

背景技術(shù)

離子液體（Ionic Liquid）是指由有機(jī)陽離子和無機(jī)或有機(jī)陰離子組成的一類液體，相較于傳統(tǒng)易揮發(fā)的有毒溶劑，離子液體具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性、非揮發(fā)性、不可燃性、幾乎沒有蒸汽壓等優(yōu)點(diǎn)，是一種廣泛應(yīng)用于有機(jī)合成、生物催化、電化學(xué)等領(lǐng)域的“綠色溶劑”。近年來研究人員用細(xì)菌、真菌、小鼠、魚類、哺乳動(dòng)物細(xì)胞系等實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯堪l(fā)現(xiàn)，離子液體存在生物毒性。隨著離子液體越來越廣泛的應(yīng)用，它所存在的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)也成為一個(gè)研究的熱點(diǎn)。

人體肝癌細(xì)胞（HepG2）是從人類肝臟細(xì)胞瘤中分離出的一類細(xì)胞株，增殖速度快，便于培養(yǎng)。該細(xì)胞保留了正常肝細(xì)胞的眾多特性，具有人類藥物代謝相關(guān)的Ⅰ相酶和Ⅱ相酶，并具有較為完整的代謝能力。為了給日益完善的生態(tài)環(huán)境污染物標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，環(huán)境毒理學(xué)的研究者們已經(jīng)不再滿足于研究簡(jiǎn)單的致死效應(yīng)，轉(zhuǎn)而關(guān)注非致死濃度下污染物對(duì)生物的生殖毒性、神經(jīng)毒性以及代謝毒性等。糖代謝作為生物體能量代謝的重要組成部分，一直以來都是人們所研究的熱點(diǎn)。但離子液體對(duì)肝臟的糖代謝毒性還有待探究。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明旨在提供一種簡(jiǎn)單、周期性短的糖代謝毒性的評(píng)估方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種離子液體對(duì)糖代謝影響的評(píng)估方法，所述方法包括以下步驟：

（1）HepG2細(xì)胞培養(yǎng)至貼壁后，換液至暴露溶液中初次暴露培養(yǎng)；

（2）測(cè)定初次暴露后HepG2細(xì)胞的存活率和暴露前后培養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量，取存活率較高且對(duì)葡萄糖消耗量影響較大的處理組進(jìn)行第二次暴露培養(yǎng)；

（3）對(duì)步驟（2）中第二次暴露培養(yǎng)后的HepG2細(xì)胞進(jìn)行糖原含量、糖代謝相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)；

（4）對(duì)步驟（3）中的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析暴露試驗(yàn)后HepG2細(xì)胞糖代謝受到的影響，評(píng)估不同暴露濃度對(duì)糖代謝的毒性影響。

本發(fā)明步驟（1）中所述的暴露溶液是濃度為0~32mM的離子液體，所述的離子液體為咪唑類離子液體，離子液體優(yōu)選為1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽；

進(jìn)一步地，所述的暴露溶液的溶劑為暴露培養(yǎng)基，所述的暴露培養(yǎng)基以體積百分比計(jì)，每份暴露培養(yǎng)基中含有0.2%的牛血清白蛋白、1%的鏈霉素、1%的青霉素以及97.8%的DMEM高糖培養(yǎng)基。

步驟（1）中所述的初次暴露培養(yǎng)條件為37 ℃，含有5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。

步驟（2）中所述的第二次暴露培養(yǎng)條件與初次暴露培養(yǎng)相同。

步驟（3）中所述的糖代謝相關(guān)基因?yàn)镚LUT1、PYGL、GSK3β、GYS2、PKM、PFKFB3、IDH2、PDK1和/或LDHA中的一種或多種。

步驟（4）中所述的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析為使用IBM SPSS Statistic 19對(duì)步驟（3）中數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：