[發明專利]一種檢測乙肝病毒的試劑盒

在審

• 申請號: 202010128133.2
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111206118A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 劉一博;金鑫浩;任魯風;張未來;于軍
• 申請（專利權）人: 寧波胤瑞生物醫學儀器有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

本發明涉及生物技術領域，公開了一種檢測乙肝病毒的試劑盒，該試劑盒包括引物探針預混液、陽性質控品、陰性質控品以及反應預混液。該試劑盒所用的HBV?DNA的上下游引物和人GAPDH基因的上下游引物序列分別如SEQ ID No.1?4所示，HBV?DNA的熒光探針和人GAPDH基因的熒光探針序列分別如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。本發明所提供的試劑盒靈敏度、穩定性、進孔率和準確度高，且反應假陽性低，操作簡單，檢測效率高，能夠廣泛應用于HBV的臨床檢測。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種檢測乙肝病毒的試劑盒。

背景技術

病毒性肝炎可分為七類：甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、己肝和庚肝，其中，乙型肝炎患病率最高。乙型肝炎病毒(HBV)屬于嗜肝DNA病毒家族，其基因組是由兩條螺旋的DNA鏈圍成的一個環形結構，即雙鏈松弛環狀DNA(relaxed circular，rcDNA)，它包括一個長度固定的負鏈和另一長度不定的正鏈，全長約為3200bp。在感染肝細胞后，半環狀的DNA鏈延長，形成完整的環狀，即共價閉合環狀DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)?；颊吒腥疽倚透窝撞《?，導致肝臟發生病變，進而可導致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌等。雖然患者感染乙肝病毒后短期內對身體健康并不會造成很大的損失，但發病時往往已發展成慢性乙肝，治療困難，且預后較差。據統計，全世界目前有HBV攜帶者約3.5億人，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化或肝癌。此外，乙肝病毒的傳染性非常強，其可通過血液、母嬰、性及密切接觸等途徑傳播，傳染性是艾滋病毒的100倍，這也是我國為乙肝患病大國的主要原因。

目前，對于HBV的檢測主要包括抗原抗體特異性反應檢測和核酸檢測兩大類。常用的抗原抗體特異性反應檢測是酶聯免疫吸附測定(ELISA)法，這種方法簡單、快速、成本較低。但不夠精確靈敏，不能定量，特別是低濃度的標本，有時會出現假陰性，且沒有定量數值也就不能動態觀察療效、評價治療效果。因此該方法主要用于體檢篩查等。常用的核酸檢測是基于實時熒光定量PCR的檢測方法，檢測樣本血液中的HBV-DNA，即HBV-cccDNA。該方法可以對HBV-DNA進行定量檢測，且靈敏度高于ELISA方法，能夠動態反應疾病的自然過程以及對抗病毒治療應答的情況，還可以預測療效。但是該方法定量需要依靠不同濃度的標準品制備標準曲線，極大地提高了檢測成本，檢測結果是相對定量，無法做到絕對定量。同時，需要操作人員具備一定專業素質，對實驗室環境要求也較高。除此之外，對于病毒載量極低的樣本，檢測會出現假陰性，靈敏度大大地降低。

數字PCR(digital PCR，dPCR)技術是近幾年興起的第三代PCR技術，一般需要將樣品稀釋到單分子水平，并平均分配到幾萬至幾百萬個單元中進行反應，根據每個反應單元中擴增后的熒光信號相對比例和反應單元的體積，通過泊松分布計算出核酸靶分子的濃度。數字PCR技術無需采用內參基因和標準曲線，準確度高、重現性好，可以實現絕對定量分析，極大地提高了檢測靈敏度和檢出率。目前比較成熟的數字化PCR平臺，主要是伯樂公司的微滴式數字PCR和賽默飛公司的芯片式數字PCR。但是數字PCR儀器操作步驟多且復雜，微滴式數字PCR由于液滴有相對損耗，對于超低含量的目的物檢測不準，需要額外的質控體系；芯片式數字PCR的也同樣需要多種儀器組合，價格昂貴且操作不便利，無法滿足臨床便捷使用的需求。