[發(fā)明專利]一種檢測乙肝病毒的試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010128133.2
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111206118A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉一博;金鑫浩;任魯風(fēng);張未來;于軍
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波胤瑞生物醫(yī)學(xué)儀器有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京精金石知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

1.一種檢測乙肝病毒的熒光探針，其特征在于，所述的熒光探針包括用于檢測HBV-DNA的熒光探針和人GAPDH基因的熒光探針；

所述的HBV-DNA的熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述的人GAPDH基因的熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光探針，其特征在于，所述的HBV-DNA的熒光探針的5’端第5位和10位堿基為鎖核酸修飾堿基；

所述的人GAPDH基因的熒光探針的5’端第3位和8位堿基位鎖核酸修飾堿基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光探針，其特征在于，所述的熒光探針的5’端含有熒光報告基團FAM和/或CY3，所述的熒光探針的3’端含有熒光淬滅基團BHQ-1和/或BHQ-2。

4.一種檢測乙肝病毒的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括引物探針預(yù)混液；

所述的引物探針預(yù)混液包括用于檢測HBV-DNA的引物對、人GAPDH基因的引物對、權(quán)利要求1所述的HBV-DNA的熒光探針和人GAPDH基因的熒光探針；

所述HBV-DNA的引物對的上、下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；

所述人GAPDH基因的引物對的上、下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述HBV-DNA和/或人GAPDH基因的熒光探針的5’端含有熒光報告基團FAM和/或CY3，所述的熒光探針的3’端含有熒光淬滅基團BHQ-1和/或BHQ-2。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的引物探針預(yù)混液中用于檢測HBV-DNA的引物對、人GAPDH基因的引物對、HBV-DNA的熒光探針和人GAPDH基因的熒光探針的濃度比為2:2:0.5-2:0.5-2。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括反應(yīng)預(yù)混液；

所述的反應(yīng)預(yù)混液包括：dATP、dCTP、dGTP、dUTP、BSA、熱啟動Taq酶、尿嘧啶-DNA-糖基酶、ROX和單分子擴增增強劑；

所述的單分子擴增增強劑包括體積比為0.2％的TritonX-100和熱穩(wěn)定焦磷酸酶0.1-0.3U。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的反應(yīng)預(yù)混液中dATP、dCTP、dGTP、dUTP濃度均為0.4mM，BSA濃度為10μg/μL，ROX濃度為100nM，UDG酶的濃度為1U，熱啟動Taq酶的濃度為0.5-2U。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品；

所述的陽性質(zhì)控品含有10000copies/μL的HBV-DNA；

所述的陰性質(zhì)控品是10ng/μL的人正常肝細(xì)胞系DNA。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項所述的試劑盒在芯片式數(shù)字PCR平臺上檢測HBV-DNA中的應(yīng)用。