[發明專利]一種手性氨基醇類化合物的合成方法

在審

• 申請號: 202010127746.4
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN113322291A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 彭要武;田文敬;葉青;胡磊;方志成
• 申請（專利權）人: 湖北美天生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P17/10
• 分類號: C12P17/10;C12N9/04;C12N15/53
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;蔡立豐

1.一種手性氨基醇類化合物的合成方法，其特征在于，其包括以下步驟：有機溶劑和緩沖溶液中，在羰基還原酶和輔酶存在下，將如式II所示的羰基化合物進行如下所示的還原反應，得到含如式I所示的手性氨基醇類化合物的轉化液即可；所述的羰基還原酶來自圓紅酵母(Rhodotorula toruloides)的羰基還原酶；

其中，R¹為(S)-1-苯乙基和/或(R)-1-苯乙基；

*表示手性碳，其為S構型或S構型和R構型的混合物。

2.如權利要求1所述的合成方法，其特征在于，

所述的羰基還原酶選自如下(i)和/或(ii)：

(i)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(ii)對SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列在保持酶活性范圍內，進行一個或多個氨基酸的替換、缺失、改變、插入或增加，所得到的氨基酸序列；

和/或，所述的羰基還原酶為游離形式的酶、凍干粉、破碎酶液、固定化酶、或菌體形式的酶。

3.如權利要求2所述的合成方法，其特征在于，

所述的羰基還原酶的編碼基因序列選自下組：

(a)SEQ ID NO.2所示的序列；

(b)與(a)限定的序列互補的多核苷酸；或

(c)與(a)限定的序列具有至少70％以上的序列一致性的任一多核苷酸或互補序列；

和/或，所述的羰基還原酶為所述的羰基還原酶為含所述的羰基還原酶的基因工程菌全細胞破碎酶液。

4.如權利要求3所述的合成方法，其特征在于，

當所述的羰基還原酶為含所述的羰基還原酶的基因工程菌全細胞破碎酶液時，所述的如式II所示的羰基化合物與所述的酶液的質量比為2:1；

和/或，當所述的羰基還原酶為含所述的羰基還原酶的基因工程菌全細胞破碎酶液時，所述的基因工程菌全細胞破碎酶液的濃度為50g/L-100g/L；

和/或，所述的羰基還原酶的酶活為100μ/mg；

和/或，所述的羰基還原酶為(R,R)-羰基還原酶。

5.如權利要求1-4中任一項所述的合成方法，其特征在于，

所述的有機溶劑為DMSO、DMF、TMBE和甲醇中的一種或多種；

和/或，所述的有機溶劑的體積百分比濃度為1％～10％；

和/或，所述的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液、碳酸鹽緩沖溶液、Tri-HCl緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液、甘氨酸緩沖溶液、檸檬酸鹽緩沖溶液或MOPS緩沖溶液；

和/或，所述的緩沖溶液的pH值為7.0-9.0；

和/或，所述的輔酶為NADH、NADPH、NAD⁺、NADP⁺、或其組合；

和/或，所述的輔酶與所述的如式II所示的羰基化合物的摩爾百分比為0.01％-1.0％；

和/或，所述的輔酶的濃度為1mM-10mM；

和/或，所述的還原反應的溫度為10℃-50℃。

6.如權利要求5所述的合成方法，其特征在于，

所述的有機溶劑為DMSO；

和/或，所述的有機溶劑的體積百分比濃度為5％；

和/或，所述的緩沖溶液為Tris-鹽酸緩沖溶液；

和/或，所述的緩沖溶液的pH值為8.0；

和/或，所述的輔酶為NADH、NAD⁺、或其組合；

和/或，所述的輔酶與所述的如式II所示的羰基化合物的摩爾百分比為0.1％-0.6％；

和/或，所述的輔酶的濃度為5mM；

和/或，當所述的輔酶體系中的輔酶含NAD⁺時，所述的輔酶體系還包括用于所述的輔酶再生的酶和其相應的共底物；

和/或，所述的還原反應的溫度為20℃-40℃。