[發明專利]一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202010126261.3
• 申請日: 2020-02-27
• 公開（公告）號: CN111337668A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 楊正林;石毅;蔣黎;鐘凌;串俊蘭;龔波;徐雨;干盈盈;龍騰鑲
• 申請（專利權）人: 四川省人民醫院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 梁田

本發明公開了一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒及其制備方法，包括SARS?CoV?2核衣殼蛋白抗原膠體金。該試劑盒操作簡單，能夠快速診斷出患者是否感染SARS?CoV?2，利于疫情的有效控制。本發明還公開一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒的制備方法。

技術領域

本發明涉及疾病檢測領域，具體涉及一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒及其 制備方法。

背景技術

人感染了冠狀病毒后常見體征有呼吸道癥狀、發熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等。在較嚴 重病例中，感染可導致肺炎、嚴重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。目前對于新型冠狀 病毒所致疾病沒有特異治療方法。因此對于疾病的預防和早期診斷對于控制新型冠狀病毒疫 情蔓延尤為重要。

發明內容

為了提高新型冠狀病毒的早期診斷效率，本發明公開一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速 診斷試劑盒，該試劑盒操作簡單，能夠快速診斷出患者是否感染SARS-CoV-2，利于疫情的有 效控制。

本發明還公開一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒的制備方法。

本發明通過下述技術方案實現：

一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒，包括SARS-CoV-2核衣殼蛋白抗原膠體金。

一種新型冠狀病毒抗原膠體金快速診斷試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(1)將SARS-CoV-2核衣殼蛋白進行表達和純化；

(2)制備SARS-CoV-2核衣殼蛋白抗原膠體金。

SARS-CoV-2核衣殼蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

其中，步驟(1)中，SARS-CoV-2核衣殼蛋白的表達，包括如下步驟：

(11)以SARS-CoV-2核衣殼蛋白的氨基酸序列所對應的核苷酸序列為模板，設計核苷酸 序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5 所示的反向引物；

(12)經過PCR擴增、雙酶切PCR產物及載體，將SARS-CoV-2核衣殼蛋白對應的核苷酸 序列克隆至質粒載體中；

(13)利用步驟(12)所得載體轉化大腸桿菌，再進行誘導培養；

(14)對培養后的大腸桿菌進行離心，獲取SARS-CoV-2核衣殼重組蛋白。

進一步的，步驟(12)中，所述質粒載體為pET28a、pET22b、pET21b、pET32a、pET40、pGex-6P-1和pMal-c2x中的任意一種。

進一步的，步驟(13)中，大腸桿菌采用E.coli BL21或者Rossetta菌株，誘導培養方法 為：將轉化后的大腸桿菌涂布于含有氨芐青霉素或卡那霉素的平板中，于37℃孵育，然后挑 取單菌落接種于液體培養基中培養2-5h，最后加入IPTG進行誘導，培養3-18h。

進一步的，步驟(14)中，SARS-CoV-2核衣殼重組蛋白的獲取方法為：收集離心后的大 腸桿菌菌體，加入緩沖液破碎菌體后離心獲取上清液，經過層析進行純化，獲得SARS-CoV-2 核衣殼重組蛋白。

步驟(1)中，SARS-CoV-2核衣殼蛋白純化后，利用抗N蛋白的抗體進行驗證。

進一步的，步驟(2)中，制備SARS-CoV-2核衣殼蛋白抗原膠體金的具體步驟如下：

(21)以氯金酸溶液、檸檬酸三鈉水溶液為原料配制膠體金溶液；