[發明專利]一種基因免疫誘導的甲狀腺相關性眼病動物模型的構建方法及雷帕霉素類藥物的應用

有效

• 申請號: 202010125422.7
• 申請日: 2020-02-27
• 公開（公告）號: CN111264469B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王悅;施秉銀;張萌;伍麗萍
• 申請（專利權）人: 西安交通大學醫學院第一附屬醫院
• 主分類號: C12N15/33
• 分類號: C12N15/33
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種基因免疫誘導的甲狀腺相關性眼病動物模型的構建方法及雷帕霉素類藥物的應用。構建方法為：1)將表達人促甲狀腺激素受體的腺病毒的母液按照1：50的體積比用PBS稀釋，得到Ad?TSHR稀釋液；2)在第0周的第1天，給實驗動物左、右臀大肌分別注射25uL的Ad?TSHR稀釋液；3)在第3、6、10、14、18、22、26、30周均重復步驟2)的操作，直至誘發實驗動物產生甲狀腺相關性眼病，即成功構建基因免疫誘導的甲狀腺相關性眼病動物模型。本發明是對甲狀腺相關眼病模型領域的空白的填補，也是雷帕霉素類對甲狀腺相關眼病的治療的一項新的探索。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，涉及一種基因免疫誘導的甲狀腺相關性眼病 動物模型的構建方法及雷帕霉素類藥物的應用。

背景技術

Graves’病(Graves’Disease，GD)是又稱毒性彌漫性甲狀腺腫，是一種器官 特異性自身免疫性疾病，其發病機制為機體產生了針對促甲狀腺激素受體 (thyroidstimulating hormone receptor，TSHR)的抗體(thyrotropin receptor antibody，TRAb)。

甲狀腺相關性眼病，又稱Graves’眼病(Graves’Ophthalmopathy，GO)是Graves’病的一種常見的甲狀腺外并發癥，在Graves’病患者中的發病率達到了20％-50％。 作為一種自身免疫介導的炎癥反應性疾病，GO的發生是機體在遺傳與環境共同 作用下打破T細胞對自身抗原的免疫耐受，進而抗原特異性T細胞在甲狀腺和眼 眶組織進行特異性交叉反應，啟動眼眶纖維母細胞的活化，產生眼眶內透明質酸 沉積、新生脂肪形成、眼外肌增粗等特征性病理改變，從而導致眼球突出、眼裂 增大、復視、視力下降等臨床表現。目前臨床上針對Graves’眼病治療方法主要 為大劑量糖皮質激素靜脈注射、球后放療、I131治療以及手術治療等，這些技術 都是針對已產生明確病理改變的患者的治療，有效率低、復發率高、副作用大， 嚴重影響患者的生活質量。

動物模型作為臨床前研究的重要手段，既可以全面闡述疾病的發病機制，還 可以評估新的治療方法。近年來GD動物模型的研究取得了重要進展，其中TSHR- 腺病毒模型無論是成功率還是可復制性等方面均受到廣泛推崇；GO動物模型也 在不斷的探索和嘗試中，包括TSHR-質粒輔助電穿孔和TSHR-腺病毒多次注射的 方案，但分別在重現甲亢狀態和眼病狀態存在不足。

雷帕霉素(rapamycin)，又名西羅莫司(sirolimus)，是由吸水鏈霉菌FC904發 酵產生的大環內酯類化合物，主要作用于哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target ofrapamycin，mTOR)，通過抑制mTOR通路，整合體內微環境的不同反 應信號發揮免疫穩態調節作用，功能主要包括調節細胞生長、增殖與代謝。目前 臨床上，雷帕霉素主要作為器宮移植的抗排斥反應和抗腫瘤的治療藥物，具有活 性高、用量小，以及毒性低等優點。研究發現，雷帕霉素可以通過單用和與其他 藥物合用參與自身免疫性疾病的治療。其通過抑制mTOR通路，促進CD4+T細 胞向調節性T細胞(regulatory T cell，Treg)分化，并使CD8+T細胞增殖降低， 更趨向于記憶性CD8+T細胞分化，從而干預自身免疫性疾病的發生與發展。目前，雷帕霉素對自身免疫性疾病的作用主要集中于系統性紅斑狼瘡(systemic lupuserythematosus，SLE)及其并發癥狼瘡性腎病的研究，對于其他免疫性疾病， 尤其是甲狀腺相關自身免疫性疾病領域內還是空白。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供基因免疫誘導的甲狀 腺相關性眼病動物模型的構建方法及雷帕霉素類藥物的藥物應用，通過該構建方 法可以成功構建甲狀腺相關性眼病動物模型，并且雷帕霉素類藥物對于甲狀腺相 關性眼病動物不僅能有效改善其球后纖維化和脂肪沉積，還能有效改善其甲亢狀 態。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明公開了一種基因免疫誘導的甲狀腺相關性眼病動物模型的構建方法， 包括以下步驟：