[發明專利]檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202010124942.6
• 申請日: 2020-02-27
• 公開（公告）號: CN111208291A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發明（設計）人: 丁建華;劉振世;顧麗;薛婷;王琳;龐吉豐
• 申請（專利權）人: 江蘇澤成生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/533;G01N33/535;G01N33/569
• 代理公司: 上海聯科律師事務所 31350
• 代理人: 趙旭

1.檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：包括相互獨立包裝的抗試劑A、抗試劑B、磁微粒試劑、校準品、質控品、清洗液和發光底物；

所述抗試劑A為包括異硫氰酸熒光素標記的幽門螺旋桿菌抗體連接物的BSA緩沖溶液；所述抗試劑A通過包括以下步驟的操作制備而成：

Sa1：用抗試劑緩沖液將異硫氰酸熒光素配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的異硫氰酸熒光素溶液；

Sa2：向幽門螺旋桿菌抗體中加入所述幽門螺旋桿菌抗體質量1.1～1.5倍的所述異硫氰酸熒光素溶液并充分混合；

Sa3：用pH為8～9的碳酸鹽緩沖液調節pH平衡，再用凝膠層析分離純化制得異硫氰酸熒光素標記的幽門螺旋桿菌抗體包被抗體；

所述抗試劑B為包括堿性磷酸酶標記的幽門螺旋桿菌抗原連接物的BSA的緩沖溶液；所述抗試劑B通過包括以下步驟的操作制備而成：

Sb1：用抗試劑緩沖液將堿性磷酸酶配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的堿性磷酸酶溶液；

Sb2：用幽門螺旋桿菌抗原和堿性磷酸酶分別將反應基團分別活化，然后按照摩爾比為堿性磷酸酶：幽門螺旋桿菌抗原為1:1～1:3的比例，在催化劑的催化下充分混勻進行偶聯反應；

Sb3：使用pH為8～9的Tris緩沖液調節pH平衡，再用凝膠柱分離純化制得堿性磷酸酶標記的幽門螺旋桿菌抗原連接物；

所述磁微粒試劑通過包括抗異硫氰酸熒光素羊抗FITC與羧基磁珠偶聯物的BSA緩沖溶液；

所述校準品和所述質控品均通過包括以下步驟的操作制備而成：在1L的含BSA緩沖液中加入0.01～0.05g的四環素和0.1～0.5g的硫酸新霉素，然后加入幽門螺旋桿菌抗體并充分溶解；

所述清洗液通過將150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羥甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐溫20溶于900ml雙蒸水中，再用HCl調整至pH7.2～7.6，最后用雙蒸水定容至1000ml制備而成；

所述發光底物通過將ALPS溶解于緩沖液中制備而成。

2.根據權利要求1所述的檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：所述抗試劑緩沖液通過包括以下步驟的操作制備而成：準確稱取如下組分：10～20gNa₂PO₃H·12H₂O、1～2gNaPO₃H₂·12H₂O、3～10g新生牛血清；將稱得的各組分加入1L的純化水中，充分攪拌至完全溶解；調節pH值為5～6即得。

3.根據權利要求2所述的檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：調節pH值的試劑為4M的HCl。

4.根據權利要求1所述的檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：Sa2在避光條件下操作。

5.根據權利要求1所述的檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：所述校準品和所述質控品均經過0.22μm濾膜處理。

6.根據權利要求1所述的檢測血清中幽門螺旋桿菌抗體含量的試劑盒，其特征在于：所述磁微粒試劑通過包括以下步驟的操作制備而成：

Sc1：將充分混勻后的羧基磁珠濃縮液在磁場內放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠體積2～5倍的磁微粒緩沖液，震蕩清洗20～30min后在磁場內放置15～20min再吸去上清；重復清洗羧基磁珠1～3遍；最后將羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液；

Sc2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液質量0.8～1.2％的抗異硫氰酸熒光素羊抗FITC，在2～8℃內保持混勻狀態反應16～20h；

Sc3：將Sc2制得的溶液在磁場中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒緩沖液洗1～3遍，隨后定容至8～12mg/mL，2～8℃保存。