[發(fā)明專利]一種用于早期賁門(mén)腺癌篩查的自身抗體聯(lián)合檢測(cè)ELISA試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010123247.8
• 申請(qǐng)日: 2020-02-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111323587B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王立東;陳瑤;宋昕;趙學(xué)科;李貝;韓雪娜;范宗民;王苒;楊苗苗;王盼盼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41155
• 代理人: 付紅莉;周玉青

本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種用于早期賁門(mén)腺癌篩查的自身抗體聯(lián)合檢測(cè)ELISA試劑盒，該試劑盒包括固相載體和包被于固相載體上的腫瘤相關(guān)抗原，所述腫瘤相關(guān)抗原由P53、CDH1、NRG1、MDM2、RHOA和IVL組成。進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、第二抗體、第二抗體稀釋液、陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、顯色液、終止液和洗滌液。本發(fā)明的ELISA試劑盒可以有效檢測(cè)賁門(mén)腺癌，尤其是早期賁門(mén)腺癌，其檢測(cè)靈敏度高達(dá)86%，特異度也高達(dá)到88%，可用于賁門(mén)腺癌高發(fā)區(qū)無(wú)癥狀人群的大規(guī)模篩查，有利于無(wú)癥狀高危人群篩查和早期發(fā)現(xiàn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和腫瘤學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種用于早期賁門(mén)腺癌篩查的自身抗體聯(lián)合檢測(cè)ELISA試劑盒。

背景技術(shù)

賁門(mén)位于食管胃交界處的下方與胃最相鄰的部位，即從鱗狀上皮-柱狀上皮交界處向下延伸約2cm。Stein等將食管胃交界腺癌(adenocarcinoma of the eso phagogastric junction,AEG)分為三型,Ⅰ型AEG為源于特殊腸化的遠(yuǎn)端食管腺癌；Ⅱ型為真正的賁門(mén)腺癌，源于賁門(mén)上皮或食管胃交界處腸化的短片段；Ⅲ型為亞賁門(mén)腺癌，累及食管胃交界和遠(yuǎn)端食管。我國(guó)以Ⅱ型為主，本專利中的所述的賁門(mén)腺癌均為Ⅱ型賁門(mén)腺癌。

在我國(guó)的北部尤其是河南省林州市(原林縣)及其相鄰的輝縣，賁門(mén)腺癌的死亡率和發(fā)病率在各類惡性腫瘤中位居前列，林州市人民醫(yī)院每年實(shí)施手術(shù)治療的原發(fā)性食管癌與賁門(mén)腺癌患者的構(gòu)成比中，食管癌約為60％，賁門(mén)腺癌約為40％。而其引起的死亡達(dá)居民總死亡原因的20％。由于缺乏特異度臨床癥狀，超過(guò)90％的賁門(mén)腺癌患者都在中晚期才就醫(yī)，此時(shí)的5年生存率僅為10％左右，而早期賁門(mén)腺癌的5年生存率可達(dá)80％-90％以上，因此及時(shí)診斷直接影響到賁門(mén)腺癌患者的生存率。目前，對(duì)無(wú)癥狀人群進(jìn)行胃鏡普查，是發(fā)現(xiàn)早期賁門(mén)腺癌的主要技術(shù)手段，盡管胃鏡逐漸普及，但其用于賁門(mén)腺癌普查時(shí)，需要消耗大量的人力、物力資源，且患者接受度低。因此在早期用非侵入性的方法，對(duì)于早期賁門(mén)腺癌的診斷和預(yù)后有重要意義。近年的研究發(fā)現(xiàn)了一系列惡性腫瘤的相關(guān)抗原，其中一些已經(jīng)應(yīng)用于臨床輔助診斷，比如甲胎蛋白已作為肝癌診斷的一項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)、CA125已應(yīng)用于卵巢癌的普查和篩選，癌胚抗原(CEA)己作為早期診斷腸道腺癌特異度標(biāo)志物。然而尚無(wú)賁門(mén)腺癌特異相關(guān)抗原。因此，尋找高效、特異的賁門(mén)腺癌分子標(biāo)志物越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外的重視。

腫瘤相關(guān)抗原(Tumor-associated Antigen，TAA)是與病理生理過(guò)程相關(guān)的可測(cè)量的變化。申請(qǐng)?zhí)枮?01910471686.5的發(fā)明專利公開(kāi)了一種用于賁門(mén)腺癌篩查的自身抗體聯(lián)合檢測(cè)ELISA試劑盒，該試劑盒包括固相載體和包被在固相載體上的腫瘤相關(guān)抗原，所述腫瘤相關(guān)抗原由Dock10、IVL、CDH1和P53組成，可用于早期賁門(mén)腺癌的篩查，其檢測(cè)靈敏度雖然達(dá)到了87.5％，但檢測(cè)的特異度較低，僅有75％；因此，非賁門(mén)腺癌患者采用該試劑盒進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，誤診率較高。本研究團(tuán)隊(duì)在前期利用全基因組關(guān)聯(lián)分析、全基因組測(cè)序和全基因組外顯子測(cè)序等技術(shù)建立的基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用自身抗體芯片技術(shù)篩選出6種TAA，分別為P53、CDH1、NRG1、MDM2、RHOA和IVL，并且發(fā)現(xiàn)在賁門(mén)粘膜上皮發(fā)生癌變之前就能夠檢測(cè)到上述6種TAA的自身抗體存在，這些自身抗體對(duì)于賁門(mén)腺癌和癌前病變患者具有較高的特異度和敏感性。且與單個(gè)自身抗體檢測(cè)方法相比，用多個(gè)腫瘤相關(guān)抗原來(lái)聯(lián)合檢查患者體內(nèi)自身抗體的表達(dá)情況，有利于提高針對(duì)某一腫瘤的檢出率。然而，應(yīng)用P53、CDH1、NRG1、MDM2、RHOA和IVL這6種TAA來(lái)檢測(cè)賁門(mén)腺癌患者血清中相應(yīng)自身抗體的表達(dá)并未見(jiàn)報(bào)道。

因此，本研究提出一種可用于早期賁門(mén)腺癌診斷的ELISA試劑盒，這將會(huì)推動(dòng)我國(guó)賁門(mén)腺癌的診治水平，也為將來(lái)對(duì)賁門(mén)腺癌的進(jìn)一步研究提供思路。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題和不足，本發(fā)明旨在提供一種用于早期賁門(mén)腺癌篩查的自身抗體聯(lián)合檢測(cè)ELISA試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：