[發(fā)明專利]一種生物酶制作方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010122267.3
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111321126A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱小見
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南蘇仙瑤嶺生態(tài)休閑農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

1.一種生物酶制作方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

S1、原料培養(yǎng)：取用新鮮麩皮8.5g，米糠3.5g、豆餅粉2.0g、(NH4)2S040.5g、K2HP040.08g、CaC120.05g和水9.5mL放置在500mL容量的燒杯中進行混合，利用磁力攪拌器對燒杯中的混合溶劑進行混合攪拌，接著使用pH為5.0的標準緩沖液對混合溶液的pH值進行校準，在完成混合溶液pH值校準后將pH計的電極用蒸餾水沖洗后浸入到燒杯的培養(yǎng)基中，從pH計的刻度讀出培養(yǎng)基的pH值，將復(fù)合電極和電阻溫度計置于培養(yǎng)基中，從燒杯遠離電極的一端緩慢加人適量的鹽酸和氫氧化鈉，使培養(yǎng)基達到并保持pH值為5.5；

S2、原料發(fā)酵：將步驟S1中燒杯內(nèi)部的培養(yǎng)基置于容量250mL的三角瓶中，對三角瓶采用變溫培養(yǎng)，完成原料的發(fā)酵；

S3、生物酶提取：取用步驟S2中的發(fā)酵液100mL置于燒杯中，向100mL發(fā)酵液中加入絮凝劑，在室溫下利用攪拌器對發(fā)酵液進行攪拌，攪拌速率為2500轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時間為10分鐘，接著將混合液裝入離心管中，將離心管放入離心機中，利用離心機對離心管內(nèi)部的混合溶液進行離心處理，對完成離心處理后的混合溶液進行脫色處理，使用過濾紙板對發(fā)酵液進行一級過濾，接著對發(fā)酵液采用離子交換層析和凝膠過濾層析進行二級過濾處理，在完成發(fā)酵液的過濾處理后，選用聚丙烯膜對發(fā)酵液進行濃縮處理，對經(jīng)過濃縮處理后的發(fā)酵液先通過在烘干箱中進行烘干，最后利用熱氣流對發(fā)酵液進行完全干燥，獲得含有生物酶的凍干品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S1中，在進行混合溶液的pH值調(diào)整時，混合溶液置于25攝氏度的環(huán)境中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S2中，三角瓶采用的變溫培養(yǎng)過程為：30攝氏度堆積培養(yǎng)48小時,接著對三角瓶中的培養(yǎng)基進行翻料，最后將溫度調(diào)至27攝氏度繼續(xù)培養(yǎng)至120小時。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S3中，離心機對混合溶液離心處理的離心條件為：離心溫度5攝氏度，離心速率為8500轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為5分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S3中，脫色處理使用質(zhì)量分數(shù)為1％的中顆粒活性炭。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S3中，過濾紙板由孔徑45Hm棉花纖維、石棉和硅藻土組成，紙板過撞機的壓力為0.3MPa。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S3中，離子交換層析使用φ216cmX30cmDEAESepharoseCL6B層析柱，緩沖液體系采用pH8.0的Tris-HC1緩沖液，洗脫液為含NaC1、pH8.0的TrisHC1緩沖液。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶制作方法，其特征在于：所述步驟S3中，凝膠過濾層析使用的介質(zhì)為Hiload16/60Superdex200pg預(yù)裝柱，緩沖液體系采用pH8.0的Tris-HCl緩沖液。