[發(fā)明專利]一種腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010121809.5
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111363671B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發(fā)明（設計）人: 周開臣;楊柳;王荃;姚智
• 申請（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12M1/24;C12N1/04
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 王夢

本發(fā)明公開了一種腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶及其制備方法，該培養(yǎng)瓶包括密封封裝的培養(yǎng)瓶和灌裝在培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液；依次通過將基礎培養(yǎng)基溶液、L?半胱氨酸鹽水溶液和刃天青水溶液按比例混合得到的基礎培養(yǎng)液灌裝至培養(yǎng)瓶中并密封封裝；對密封的培養(yǎng)瓶進行高壓滅菌；最后將1640培基液、BI血清、維生素K和氯化血紅素按比例混合得到活性添加劑混合液注入高壓滅菌并降至室溫的培養(yǎng)瓶中完成制備；該厭氧微生物培養(yǎng)瓶采用培養(yǎng)瓶瓶體及封裝件、配制培養(yǎng)液的各組分均采用市售產(chǎn)品，原料易于獲得，實現(xiàn)了降低厭氧培養(yǎng)的門檻和成本，讓厭氧培養(yǎng)、儲存和運輸?shù)牟僮鞫几鼮楹唵危抑苽浞椒ê唵我仔校洗笠?guī)模生產(chǎn)的要求，且滿足醫(yī)院、科研單位的使用需求。

技術領域

本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術領域，特別涉及一種腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶及其制備方法。

背景技術

目前大部分環(huán)境中存在的微生物都無法培養(yǎng)，可培養(yǎng)的微生物約占總數(shù)量的1％左右，之所以不能被培養(yǎng)，除了豐度較低以外，還包括培養(yǎng)條件不夠優(yōu)化，包括溫度、pH、氧氣利用率、營養(yǎng)等。從技術上來說，溫度可以調(diào)節(jié)，pH也可以調(diào)節(jié)，一般難度就在厭氧處理和營養(yǎng)上；因此，厭氧微生物在體外培養(yǎng)過程的重點在于厭氧環(huán)境及其營養(yǎng)環(huán)境的模擬。

目前，研究中常用的厭氧培養(yǎng)技術，用厭氧箱，厭氧袋，厭氧罐，操作繁瑣，成本較高，對于固體培基，涂布完板子，可以在厭氧箱，厭氧袋，厭氧罐中培養(yǎng)，但是用液體培基增殖時，開放的空間反而不方便操作，之前有研究人員解決了厭氧環(huán)境的問題，但是厭氧瓶中營養(yǎng)不夠，微生物還是生長不好。本發(fā)明開發(fā)的厭氧培養(yǎng)瓶，在除氧的基礎上，添加上具有活性的營養(yǎng)物質(zhì)，保證微生物的生長，并且操作方便，成本低廉，適合廣大微生物研究的技術人員具體實施。

此外，厭氧菌的保存也一直是個大問題，如果按照正常的細菌凍存方法，肯定要跟氧氣接觸，除非是在厭氧箱中操作，但是厭氧箱制備無氧環(huán)境麻煩，帶著橡膠手套操作也不方便，此外還需要額外準備無氧凍存液。另外，厭氧菌的運輸目前都是采用將細菌在特定條件下制作成干粉，然后裝在安瓿瓶中除氧密封，在到達目的地以后，重新活化的方法。對于長距離的運輸，這種干粉的處理方式很合適，但是短距離的運輸，這樣操作性價比就不高了，從一個實驗室到另外一個實驗室，厭氧菌的運輸只能依靠厭氧袋和厭氧罐的轉(zhuǎn)移，不太方便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種便于腸道厭氧微生物的培養(yǎng)、儲存和運輸?shù)膮捬跷⑸锱囵B(yǎng)瓶。

本發(fā)明的另一目的是提供上述腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶的制備方法

為此，本發(fā)明技術方案如下：

一種腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶，包括密封封裝的培養(yǎng)瓶和灌裝在培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液；其中，培養(yǎng)液包括由以體積份計的100份基礎培養(yǎng)基水溶液、4份2.5wt.％的L-半胱氨酸鹽水溶液和0.1份0.1wt.％的刃天青水溶液混合得到的基礎培養(yǎng)液，以及體積份數(shù)為基礎培養(yǎng)液的4％的活性添加劑混合液配制而成；活性添加劑混合液由以體積份計的10份1640培基液、1份BI血清、1份維生素K和1份氯化血紅素混合而成。

該腸道厭氧微生物培養(yǎng)瓶是密封的，完全滿足厭氧環(huán)境，而培養(yǎng)液則用于為厭氧微生物提供適宜的營養(yǎng)環(huán)境；其中，培養(yǎng)液中的L-半胱氨酸具有較強的還原性，其與密封封裝的培養(yǎng)瓶中氧氣在高溫作用下發(fā)生氧化反應，生成L-胱氨酸，除氧同時還進一步提供了滿足微生物培養(yǎng)的氨基酸；刃天青為氧氣指示劑，其用于指示瓶中的氧氣含量，有氧氣則為粉紅色或淺藍色，便于觀察培養(yǎng)瓶內(nèi)部狀態(tài)是否滿足厭氧培養(yǎng)環(huán)境的要求；而活性添加劑混合液對基礎培養(yǎng)液進行營養(yǎng)補充，經(jīng)實驗驗證，該活性添加劑能夠滿足大多數(shù)厭氧微生物的生長。

優(yōu)選，所述培養(yǎng)液的灌裝體積為培養(yǎng)瓶容積的90％～95％。

優(yōu)選，所述基礎培養(yǎng)基為粉末狀的RAM基礎培養(yǎng)基、CDC基礎培養(yǎng)基、RCM基礎培養(yǎng)基或MRS基礎培養(yǎng)基。