[發明專利]一種復合型石墨烯包裹磷脂酶D及其制備方法和在產磷脂酰絲氨酸中的應用

在審

• 申請號: 202010120816.3
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111304191A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 陳可泉;馮嬌;王昕
• 申請（專利權）人: 南京凱諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12P13/06
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 胡建華

1.一種復合型石墨烯包裹磷脂酶D的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將產磷脂酶D菌株，培養，離心，所得上清液即為粗酶液；

(2)將步驟(1)得到的粗酶液與碳酸氫鈉溶液混合后，加入石墨烯粉末，攪拌；

(3)向步驟(2)所得物料中加入氯化鈣溶液，攪拌，靜止，離心，即得。

2.根據權利要求1所述的復合型石墨烯包裹磷脂酶D的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，碳酸氫鈉溶液中碳酸氫鈉的濃度為200～400mmol/L，碳酸氫鈉溶液的溶劑為水；粗酶液與碳酸氫鈉溶液按照1:1的體積比在4℃下進行混合。

3.根據權利要求1所述的復合型石墨烯包裹磷脂酶D的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，石墨烯粉末的目數為1000～8000目；石墨烯粉末的濃度為0.25mg/mL；所述的攪拌為在500～1000rpm的轉速下攪拌30～60min。

4.根據權利要求1所述的復合型石墨烯包裹磷脂酶D的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的氯化鈣溶液中氯化鈣的濃度為1～5g/L，氯化鈣溶液的溶劑為水；氯化鈣溶液與粗酶液的體積比為1:1～7:1。

5.根據權利要求1所述的復合型石墨烯包裹磷脂酶D的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述的攪拌為在1000～2000rpm的轉速下攪拌1～5min；靜置的時間為30～60min。

6.權利要求1～5中任意一項所述方法制備得到的復合型石墨烯包裹磷脂酶D。

7.權利要求6所述復合型石墨烯包裹磷脂酶D在產磷脂酰絲氨酸中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：將復合型石墨烯包裹磷脂酶D、醋酸-醋酸鈉緩沖液和L-絲氨酸、磷脂酰膽堿、二氯甲烷混合，反應。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，控制復合型石墨烯包裹磷脂酶D的用量，使磷脂酶D的酶活為0.2～0.8U/mL；L-絲氨酸與磷脂酰膽堿的摩爾比為10:1～30:1；磷脂酰膽堿的濃度為1～15g/L；醋酸-醋酸鈉緩沖液與二氯甲烷的體積比為1:1～3:1。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述的反應為在30～40℃下，200～500rpm的轉速下反應1～8h。