[發明專利]一種去除C1酯酶抑制劑制備原料中雜蛋白IgM的方法

有效

• 申請號: 202010120179.X
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111269307B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 紀德銘;彭焱;詹騫;周志軍;汪菲菲;陳克金;胡勇;李策生
• 申請（專利權）人: 國藥集團武漢血液制品有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

本發明提供了一種去除C1酯酶抑制劑(C1?INH)制備原料中雜蛋白IgM的方法，所述方法包括提供C1酯酶抑制劑制備原料以及對制備原料進行PEG(聚乙二醇)沉淀處理的步驟。本發明方法方便快捷，在進行層析步驟之前就對原料中最難去除的雜蛋白IgM進行去除，且去除方法簡便高效，并減少了層析步驟，有效節省了樹脂和儀器使用成本。本發明對于人C1 INH制備工藝的優化具有較高的參考價值。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種去除C1酯酶抑制劑制備原料中雜蛋白IgM的方法。

背景技術

C1酯酶抑制劑(C1-INH，C1-esterase inhibitor又稱C1抑制劑或C1滅活劑)是一種不耐熱的血漿蛋白，可以抑制補體因子1(C1)的酯水解活性。C1INH現在被定義為一種絲氨酸蛋白酶抑制劑(Serpin)，它是一種血漿蛋白，能抑制多種蛋白酶，與補體、凝血、纖溶和激肽釋放的活化與拮抗平衡有密切的聯系，在多種生理系統中具有重要的調節作用。C1INH主要由肝臟合成，也可以由單核細胞、表皮成纖維細胞、內皮細胞分泌，其結構為單鏈糖蛋白，表觀分子量為100～105kDa。血漿中含量約為0.2mg/ml，相當于1血漿單位(PU)每毫升，由于個體差異使含量處于0.14mg/ml和0.38mg/ml之間。

C1INH的缺乏會引起一種疾病，稱為遺傳性血管性水腫(HAE)，這是一種可以致殘同時具有潛在致命性的疾病。它是由于C1抑制劑的合成障礙或功能缺陷所致的常染色體顯性遺傳病，臨床特點為皮膚黏膜反復發作、自限性、局限性、非凹陷性水腫。當急性水腫發生在上呼吸道時常因喉頭水腫導致患者窒息死亡。在疾病的多種治療藥物中，C1-INH副作用小，安全性和有效性高。除了在HAE的治療中發揮作用，C1-INH還能與細菌內毒素、黏附分子E，P-選擇素等結合發揮非蛋白酶抑制功能。

目前制備C1-INH的方法為三步層析：CM陽離子交換層析、DEAE陰離子交換層析、HIC疏水層析，層析步驟較多，一次實驗的周期較長，實驗前準備及試驗后處理較復雜，且終產品中仍含有少量IgM無法去除。

發明內容

本發明提供了一種去除C1酯酶抑制劑(C1-INH)制備原料中雜蛋白IgM的方法，所述方法包括提供C1酯酶抑制劑制備原料以及對制備原料進行PEG沉淀處理的步驟。

具體而言，所述方法如下步驟：

(1)提供C1酯酶抑制劑制備原料，并調整原料的pH為6.0-7.0，優選，6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9，更優選，6.8；

(2)向步驟(1)的原料中加入一定量的PEG，混勻；優選的，所述PEG的用量占C1酯酶抑制劑制備原料的質量分數為10％-15％，優選，12％；

(3)對步驟(2)的混合物離心取上清，離心條件為3000g-20000g，離心10min-60min，優選的，10000g-15000g，離心10min-30min；溫度條件為10℃-40℃，優選，20℃-30℃。

進一步的，步驟(2)在加入PEG之后，通過充分攪拌混勻。

優選的，所述PEG為PEG4000。

進一步的，在步驟(3)之后，還包括對得到的上清液進行離子交換層析的步驟。

優選的，所述離子交換層析為CM離子交換層析(羧甲基陽離子交換層析)；優選的，所述CM離子交換層析柱的類型包括但不限于XK16/20、BPG140/500等；

優選的，所述洗脫液的鹽離子濃度為190mM-220mM，優選，200mM-210mM。

進一步的，所述C1酯酶抑制劑制備原料來源于血漿。