[發明專利]一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法

有效

• 申請號: 202010119461.6
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111122752B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 王興龍;任一平;蔡強;諸寅;楊大進;許嬌嬌
• 申請（專利權）人: 浙江清華長三角研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 趙衛康

本發明公開了一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，以河豚魚為樣本，經清洗、去雜、均質、定量混合、凍干、粉碎、過篩、分裝、輻照、保藏等工藝，制得候選標準物質。對分裝好的標準物質，進行最小取樣量、均勻性、穩定性檢驗，確保其滿足國家標準物質特性的需求。本發明的制備方法，可更好地保留基質中的原有成分，且具有較好的均勻性、穩定性、復水性以及更長的保質期，填補了國內外河豚毒素基質標準物質的空白；本發明的基質標準物質可有效評價相關實驗室的河豚毒素檢測能力和水平，可用于河豚毒素定性定量分析的質量控制，確保水產品中河豚毒素檢測的準確性，為食品安全保駕護航。

技術領域

本發明屬于計量技術領域，具體涉及一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法。

背景技術

河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）是鲀魚類（俗稱河豚魚）及其它生物體內含有的一種生物堿，其分子式為C₁₁H₁₇O₈N₃，為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發現的毒性最大的神經毒素之一，其毒性比氰化物還要高1250多倍，0.5mg即可致人于死命。長期以來，國內外學者對河豚毒素的起源進行了一系列研究。目前，多數專家學者認為，TTX 的真正來源不是動物本身, 而是通過食物鏈聚集或由其共生的微生物產生。人工飼養時，通過把握水源與投喂的飼料，改變河豚的食物鏈，能有效控制河豚毒素的產生，但對于人工養殖的河豚魚也需要嚴格監控其毒素含量，確保食用安全。

隨著河豚毒素的毒理、形態以及代謝分析的深入，水產品中河豚毒素必將是食品安全檢測關注的重點內容，與之配套的檢測技術需要進一步成熟并成體系，河豚毒素相關的基質標準物質的需求更加迫切。截止目前，查閱文獻與國際權威標準物質數據庫（例如國際標準物質數據庫COMAR、歐盟標準物質數據庫IRMM和ERM、美國National Institute ofStandards and Technology (NIST) 、加拿大National Research Council of Canada(NRCC)等），世界各國食品基質生物毒素類標準物質均不包括河豚毒素基質標準物質。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，填補國內外河豚毒素基質標準物質的空白，且制備的標準物質具有良好的均勻性和穩定性。

為達到上述目的，本發明采用的具體技術方案如下：

一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，包括以下步驟：

S1. 樣本采集：采集野生河豚魚作為基質標準物質的陽性樣本，養殖的河豚魚作為陰性樣本；

S2. 樣本處理：分別將陽性樣本和陰性樣本分解出肌肉、肝臟，稱量后將組織剪碎，充分均質；

S3. 候選物制備：

① 利用液相色譜-串聯質譜法，對陽性、陰性樣本中的河豚毒素含量進行測定，然后按照預設的標準物質總質量、毒素含量，計算出陽性樣本、陰性樣本混合所需的質量，按計算值混合陽性樣本和陰性樣本；

② 將混合樣本攪拌混勻，再進行冷凍干燥；

③ 將干燥后的塊狀樣本粉碎過篩，得到河豚毒素成分分析候選物；

S4. 候選物的分裝、保藏：將得到的候選物混勻，然后隨機抽取至少10份小樣，進行均勻性初篩，如果測得小樣的河豚毒素含量的RSD≤5%，則可作為河豚毒素成分分析標準物質進行樣本分裝，否則繼續延長混勻時間；樣本分裝密封，經Co-60 γ 射線照射滅菌后，在-20～-80℃冷凍保存。

S5. 性能評估：對步驟S4制備的候選物，進行最小取樣量、均勻性、穩定性檢驗。