[發明專利]一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法

有效

• 申請號: 202010119461.6
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111122752B
• 公開（公告）日: 2022-06-10
• 發明（設計）人: 王興龍;任一平;蔡強;諸寅;楊大進;許嬌嬌
• 申請（專利權）人: 浙江清華長三角研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 趙衛康

1.一種河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1. 樣本采集：采集野生河豚魚作為基質標準物質的陽性樣本，養殖的河豚魚作為陰性樣本；

S2. 樣本處理：分別將陽性樣本和陰性樣本分解出肌肉、肝臟，稱量后將組織剪碎，充分均質；

S3. 候選物制備：

① 利用液相色譜-串聯質譜法，對陽性、陰性樣本中的河豚毒素含量進行測定，然后按照預設的標準物質總質量、毒素含量，計算出陽性樣本、陰性樣本混合所需的質量，按計算值混合陽性樣本和陰性樣本；

② 將混合樣本攪拌混勻，再進行冷凍干燥；

③ 將干燥后的塊狀樣本粉碎過篩，得到河豚毒素成分分析候選物；

S4. 標準物質制備：將得到的候選物混勻，然后隨機抽取至少10份小樣，進行均勻性初篩，如果測得小樣的河豚毒素含量的RSD≤5%，則可作為河豚毒素成分分析標準物質進行樣本分裝，否則繼續延長混勻時間；樣本分裝密封，經Co-60 γ 射線照射滅菌后，在-20～-80℃冷凍保存；

S5. 性能評估：對步驟S4制備的標準物質，進行最小取樣量、均勻性、穩定性檢驗；

步驟S3中冷凍干燥的具體過程和工藝參數如下：預凍溫度 -25～-30℃，預凍時間1 h；升華干燥設定為兩個階段，第一階段升華溫度設定為-15～-25℃，升華時間10～15h，第二階段升華溫度設定為 -4～-8℃，升華時間10～15h；解析干燥溫度設定為10～20℃，解析干燥時間5～10h；

步驟S5中，最小取樣量為0.4g。

2.根據權利要求1所述的河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：步驟S5中最小取樣量和均勻性采用F檢驗進行分析；穩定性包括25℃短期穩定性和4℃長期穩定性。

3.根據權利要求2所述的河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：分別對均勻性和穩定性的檢驗結果合成標準物質定值不確定度。

4.根據權利要求1所述的河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：冷凍干燥前需要將混勻的組織樣本平鋪，平鋪厚度在1～4cm。

5.根據權利要求1所述的河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：步驟S3混合樣本混勻過程采用旋轉攪拌機連續攪拌至少2h；步驟S4候選物混勻過程采用三維混勻機至少混勻12 h。

6.根據權利要求1所述的河豚毒素成分分析標準物質的制備方法，其特征在于：步驟S3中過篩目數為75～100目。

7.根據權利要求1～6任一所述的制備方法制得的河豚毒素成分分析標準物質。

8.根據權利要求7所述河豚毒素成分分析標準物質的用途，包括水產品中河豚毒素檢測方法的驗證，以及實驗室間對河豚毒素檢測能力和水平的考核。