[發明專利]一種檢測黃牛VAMP7基因CNV標記的方法及專用試劑盒

有效

• 申請號: 202010117701.9
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111172295B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 黃永震;劉賢;孫皓明;蔡雯雯;李莉;張子敬;于翔;楊尚;施巧婷;茹寶瑞;賀花;黃必志;雷初朝;陳宏;胡沈榮
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

1.檢測黃牛VAMP7基因CNV標記的方法在黃牛分子標記輔助選擇育種中的應用，其特征在于：所述檢測黃牛VAMP7基因CNV標記的方法，包括以下步驟：以黃牛基因組DNA為模板，以引物對P1以及引物對P2為引物，分別通過實時熒光定量PCR擴增VAMP7基因的拷貝數變異區域以及作為內參的BTF3基因的部分片段，然后根據定量結果鑒定黃牛VAMP7基因的拷貝數變異類型；

所述的VAMP7基因的拷貝數變異區域位于VAMP7基因參考基因組序列AC_000170.1的14678001bp- 14686000bp；

所述的引物對P1為：

上游引物F1：5’- GCTAGCGTGTACTTTTGGTGT -3’

下游引物R1：5’- ACTTAGCTAAACAGTGGCTAGG -3’；

所述的引物對P2為：

上游引物F2：5’- AACCAGGAGAAACTCGCCAA -3’

下游引物R2：5’- TTCGGTGAAATGCCCTCTCG -3’；

所述的拷貝數變異類型是根據2*2^?ΔΔCt將定量結果分為的三類：插入型，2*2^?ΔΔCt大于2；缺失型，2*2^?ΔΔCt小于2；正常型，2*2^?ΔΔCt等于2；

具有正常型拷貝數變異類型的個體在生長性狀上較優；

所述生長性狀為十字部高；

所述黃牛選自云嶺牛。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的實時熒光定量PCR的擴增體系包括10ng/μL模板DNA 1 μL以及10 pM的引物對P1或引物對P2所對應的上、下游引物各0.5 μL。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于：所述的實時熒光定量PCR的反應程序為：95℃預變性5~10 min；95℃變性15 s，60℃退火15 s，72℃延伸30s，共39個循環。

4.如權利要求1所述的應用，其特征在于：基于引物對P1擴增的PCR產物片段大小為166bp，基于引物對P2擴增的PCR產物片段大小為166 bp。