[發(fā)明專利]新型冠狀病毒多重PCR快速檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010116995.3
• 申請(qǐng)日: 2020-02-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111187860A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莫茜;岳敏;陶悅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳閃量科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海韌辰專利代理有限公司 31331
• 代理人: 劉秋蘭

本發(fā)明公開(kāi)了一種新型冠狀病毒多重PCR快速檢測(cè)試劑盒，所述新型冠狀病毒多重PCR快速檢測(cè)試劑盒包括：PCR反應(yīng)液凍干粉、引物池凍干粉和緩沖液，其中所述引物池凍干粉包括序列表所列的引物對(duì)和熒光探針。本發(fā)明針對(duì)此類多重PCR來(lái)檢測(cè)SARS?CoV?2做了引物的體系優(yōu)化，并設(shè)計(jì)了全新的引物和探針池，可以達(dá)到在臨床上靈敏、特異性地滿足對(duì)這新冠病毒的早期快速檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種新型冠狀病毒多重 PCR快速檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒感染的肺炎患者的臨床表現(xiàn)為：以發(fā)熱、乏力、干咳為主 要表現(xiàn)。鼻塞、流涕等上呼吸道癥狀少見(jiàn)。約半數(shù)患者多在一周后出現(xiàn)呼吸 困難，嚴(yán)重者快速進(jìn)展為急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代 謝性酸中毒和出凝血功能障礙。值得注意的是，重癥、危重癥患者病程中可 為中低熱，甚至無(wú)明顯發(fā)熱。部分患者起病癥狀輕微，可無(wú)發(fā)熱，多在1周 后恢復(fù)。多數(shù)患者預(yù)后良好，少數(shù)患者病情危重，甚至死亡。

新型冠狀病毒SARS-CoV-2是一種具有包膜的、不分節(jié)段的正鏈RNA病 毒，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑約60～140nm，屬于網(wǎng)巢病毒目冠狀病毒科 Betacoronavirus。基因組長(zhǎng)度約30Kb左右。

與其他的病原不同，此次SARS-CoV-2感染存在明顯的潛伏期，最短的一 天發(fā)病，最長(zhǎng)的潛伏期據(jù)推測(cè)有24天，并且在潛伏期的病毒攜帶者具有傳 染性，因此SARS-CoV-2的早期快速診斷無(wú)論對(duì)于患者的治療還是對(duì)于疾病的 防控都至關(guān)重要。然而病人早期癥狀不明顯,臨床癥狀無(wú)法有效地篩查感染病 人(ref:DOI:10.1056/NEJMc2001899)，常規(guī)的血常規(guī)檢查、臨床檢查、胸 部影像檢查、免疫法抗原或抗體檢測(cè)也都不足在早期以對(duì)SARS-CoV-2感染確 診。因此病原體的即時(shí)核酸檢測(cè)(POCT)、特別是多重病原體的即時(shí)檢測(cè)有 特別重要的意義。

針對(duì)SARS-CoV-2的核酸檢測(cè)，國(guó)家疾控中心在2020年1月21日發(fā)布了 PCR試劑的探針和引物序列，包括病毒的核殼蛋白(nucleoprotein，N)基因 區(qū)域和ORF1ab區(qū)域。ORF1ab正向引物：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA(如SEQ ID NO:14所示)；反向引物：ACGATTGTGCATCAGCTGA(如SEQ ID NO:15 所示)；熒光探針：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'(如 SEQ ID NO:16所示)。N基因正向引物：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT(如 SEQ ID NO:17所示)；反向引物：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG(如SEQ ID NO:18所示)；熒光探針：5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'(如 SEQ IDNO:19所示)。

然而，這種單一的引物對(duì)和探針在臨床上的靈敏度不高，無(wú)法早期快速 檢測(cè)新冠病毒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中單一引物對(duì)和探針在臨床上靈敏度不高，無(wú)法早 期快速檢測(cè)新冠病毒的技術(shù)問(wèn)題，目的在于提供一種新型冠狀病毒多重PCR 快速檢測(cè)試劑盒。基于微陣列的POCT多重PCR檢測(cè)系統(tǒng)具有多重性高和樣 本結(jié)果全自動(dòng)，全封閉，一體化等優(yōu)點(diǎn)。本申請(qǐng)針對(duì)此類多重PCR來(lái)檢測(cè) SARS-CoV-2做了引物的體系優(yōu)化，并設(shè)計(jì)了全新的引物和探針池，可以達(dá)到 在臨床上靈敏、特異性地滿足對(duì)這新冠病毒的早期快速檢測(cè)。

本發(fā)明所述新型冠狀病毒多重PCR快速檢測(cè)試劑盒包括：PCR反應(yīng)液凍 干粉、引物池凍干粉和緩沖液，其中所述引物池凍干粉包括如下引物對(duì)和熒 光探針：

如SEQ ID NO:1所示的nCoV_N2-F正向引物，如SEQ ID NO:2所示的 nCoV_N2-R反向引物，以及如SEQ ID NO:3所示的nCoV_N2-P熒光探針；