[發明專利]一種體外檢測rhTSG-6抗病毒活性的方法及rhTSG-6在抗病毒藥物中的應用

有效

• 申請號: 202010116350.X
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111172326B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 王明麗;吳博;夏兵兵;何志遠;周煒;蔣敏之
• 申請（專利權）人: 蕪湖天明生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/02;A61K38/17;A61P31/14
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種體外檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6抗病毒活性的方法，其特征在于，以牛腎上皮細胞（MDBK細胞）作為測定細胞，水皰性口炎病毒（VSV）作為攻擊病毒來檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6（rhTSG-6）的抗病毒活性；

所述方法包括以下步驟：

（1）將rhTSG-6經稀釋液依次進行二倍遞增梯度稀釋，共做10個稀釋梯度，稀釋后的rhTSG-6依次加入相應96孔細胞板中；

（2）將MDBK單層細胞懸液做相應稀釋，然后加入含rhTSG-6的細胞板各孔及細胞對照組和病毒對照組各孔中，培養長至均勻的單層細胞；

（3）棄上清，向每孔中加入VSV病毒液，但細胞對照組孔內僅加維持液，置溫箱培養；

（4）觀察并統計各稀釋梯度CPE孔數和無CPE孔數，根據Reed-Muench法計算rhTSG-6的效價。

2.根據權利要求1所述的用于體外檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6抗病毒活性的方法，其特征在于，步驟（1）中，所述稀釋液為10% FBS DMEM培養基；細胞對照組和病毒對照組只加稀釋液。

3.根據權利要求1所述的用于體外檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6抗病毒活性的方法，其特征在于，步驟（1）中，稀釋后的rhTSG-6按照100μL/孔的量加入到96孔細胞板中。

4.根據權利要求1所述的用于體外檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6抗病毒活性的方法，其特征在于，步驟（2）中，將MDBK單層細胞懸液稀釋至細胞密度為4.0×10⁵~6.0×10⁵個/mL；稀釋后的MDBK單層細胞懸液按照100μL/孔的量加入到含rhTSG-6的細胞板各孔及細胞對照組和病毒對照組各孔中。

5.根據權利要求1所述的用于體外檢測重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6抗病毒活性的方法，其特征在于，步驟（3）中，VSV病毒液的加入量為100TCID₅₀/孔；所述維持液為含2% FBSDMEM培養基；所述培養的條件為37℃、5％CO₂條件下培養18～24小時。

6.rhTSG-6在制備抗VSV病毒藥物中的應用。

7.根據權利要求6所述的rhTSG-6在制備抗VSV病毒藥物中的應用，其特征在于，以權利要求1-5任意一項所述的方法來檢測rhTSG-6的抗VSV病毒活性。