[發(fā)明專利]rhTSG-6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒及其使用方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010116349.7
• 申請(qǐng)日: 2020-02-25
• 公開（公告）號(hào): CN111273029B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王明麗;周煒;何志遠(yuǎn);夏兵兵;吳博;蔣敏之
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖天明生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括包被有抗rhTSG-6多克隆抗體的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記rhTSG-6多克隆抗體、rhTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、樣品稀釋液、洗滌液、顯色液A液、顯色液B液、終止液；

所述rhTSG-6重組抗原的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，rhTSG-6多克隆抗體為rhTSG-6重組抗原免疫Balb/c小鼠得到的抗血清經(jīng)多次純化后得到的精制抗體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記rhTSG-6多克隆抗體為rhTSG-6重組抗原免疫Balb/c小鼠的所獲抗血清，經(jīng)親和層析法純化后采用辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述包被有抗rhTSG-6多克隆抗體的酶標(biāo)板的制備方法為：將精制的rhTSG-6多克隆抗體經(jīng)0.05M碳酸鹽緩沖液稀釋后包被酶標(biāo)板中，4℃過夜，后用pH 7.0內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為10%小牛血清的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液封閉，洗滌拍干后裝入包裝袋抽真空保存。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述rhTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為rhTSG-6重組抗原與凍干保護(hù)劑混合，經(jīng)冷凍干燥制備得到。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為pH 7.0內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為10%小牛血清的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液；所述洗滌液為pH 7.0內(nèi)含有體積分?jǐn)?shù)為0.05% Tween-20的0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述顯色液A液為加入過氧化氫溶液；所述顯色液B液為加入四甲基聯(lián)苯胺溶液；所述終止液為2mol/L硫酸溶液。

8.一種非診斷目的的如權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步驟：

（1）將rhTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品以樣品稀釋液稀釋成系列濃度的rhTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

（2）向包被有精制rhTSG-6多克隆抗體的酶標(biāo)板中分別加入hTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液、待測(cè)樣品樣品液，按100μl/孔加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)；于37℃溫箱內(nèi)靜置30min；棄液，加入洗滌液200μl/孔，洗滌5次后拍干；

（3）加入1:30000稀釋的酶標(biāo)抗rhTSG-6多克隆抗體100μl/孔，于37℃溫箱內(nèi)靜置30min；棄液，加入洗滌液200μl/孔，洗滌5次后拍干；

（4）加入顯色液B液50μl/孔，再加入顯色液A液50μl/孔，輕敲板框混勻，室溫避光反應(yīng)10min；

（5）加入終止液50μl/孔終止反應(yīng)，并立即在酶標(biāo)儀上測(cè)450nm處的吸光度值；

（6）以rhTSG-6蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度的負(fù)對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光度值對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出線性回歸方程，將待檢樣品孔內(nèi)吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可求得待檢測(cè)樣品中rhTSG-6的濃度。

9.一種非診斷目的的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6的定量檢測(cè)方法，其特征在于，利用權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白6雙抗體夾心ELISA法定量檢測(cè)試劑盒進(jìn)行定量檢測(cè)。