[發明專利]一種重組間充質干細胞及其制備方法和在制備治療急性肝衰竭藥物的應用

在審

• 申請號: 202010116138.3
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111235115A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 施曉雷;任昊楨;王經琳;丁義濤
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K35/28;A61P1/16
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 劉佳慧

本發明公開了一種重組間充質干細胞及其制備方法和在制備治療急性肝衰竭藥物的應用，重組間充質干細胞利用重組慢病毒感染間充質干細胞獲得；其中，重組慢病毒由過表達PTGS2的重組質粒和慢病毒包裝載體轉染細胞后獲得；過表達PTGS2的重組質粒由擴增PTGS2前引物序列和后引物序列、以及空質粒載體Ubi?MCS?3FLAG?CBh?gcGFP?IRES?puromycin制得。本發明可以提高MSCs對急性肝衰竭的治療療效。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種制備治療急性肝衰竭藥物的應用，尤其涉及一種重組間充質干細胞及其制備方法和在制備治療急性肝衰竭藥物的應用。

背景技術

急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)是一種以肝細胞迅速大量壞死和急劇下降的肝功能為特征的臨床重癥。目前肝移植是治療ALF最為有效的手段，但由于供肝來源較少等原因限制了其應用。干細胞移植已被認為是治療多種肝臟疾病的有效方式，間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)正是其中的一種，已經被證明可以緩解多種急性或慢性肝臟疾病。但是臨床試驗結果顯示治療效果并不盡如人意，無法達到預期效果。因此，探究MSCs治療肝臟疾病的具體機制，有利于對MSCs進行合理優化，提高MSCs治療效果，促進臨床轉化。

ALF主要病理改變是多種原因(藥物、病毒等)誘導肝細胞壞死，固有免疫系統激活釋放大量炎性介質，進一步誘導肝細胞死亡，加重肝臟損傷。肝臟自身在損傷情況下，部分肝細胞會重新具備再生能力。當其再生能力超過肝臟壞死時，肝臟是具有功能的。但是ALF中大量的肝細胞死亡超出了肝臟本身的代償能力，仍表現為肝功能的急劇喪失。因此，如何減輕肝臟損傷，提高肝細胞的增殖能力是緩解ALF的重要研究方向。

前期研究表明MSCs主要通過旁分泌作用，分泌大量細胞因子和生長因子，如腫瘤壞死因子誘導蛋白(tumor necrosis factor-inducible gene 6，TSG-6)、前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)和轉錄生長因子(transforming growth factor-β，TGF-β)等，發揮抗凋亡、抗炎、促增殖和調節免疫等作用，從而發揮治療作用。其中PGE₂是一種廣泛存在的生物脂質，主要是由環加氧酶(cyclooxygenase 2，COX2/PTGS2)催化分解花生四烯酸而來，在細胞的增殖、凋亡和調節免疫中均扮演重要角色。在肺部炎癥和腦損傷等模型中發現MSCs可以通過分泌PGE2發揮治療作用。因此，PGE₂修飾的MSCs是否具有更強的減輕肝臟損傷、促進肝臟再生的功能是十分有意義的研究。

目前應用MSCs移植治療ALF是一項有希望的治療途徑，但還存在一下缺陷：1、ALF主要病理改變是大量的肝細胞死亡超出了肝臟本身的代償能力，多種因素(藥物、病毒等)誘導肝細胞大量的壞死，釋放大量的損傷相關分子模式(damage-associated molecularpatterns，DAMPs)，被肝臟內固有免疫系統識別，如單核細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等，繼而產生大量炎性因子，進一步引起肝臟損傷和肝功能喪失，因此，為了保證臨床上能及時有效治療ALF，異體來源的MSCs是更佳的選擇；2、目前為止國內外的許多研究也發現干細胞移植療效不佳的現象。對這一系列文獻的回顧性研究發現主要有兩個原因制約了MSC移植治療的療效，一是由于移植的MSC在肝臟的定植效率較低，二是由于肝功能衰竭體內存在過激的炎癥反應，對移植的MSC具有一定的損傷作用。

發明內容

本發明提供一種，以克服現有技術的缺陷。

為實現上述目的，本發明提供一種重組間充質干細胞，利用重組慢病毒感染間充質干細胞獲得；其中，重組慢病毒由過表達PTGS2的重組質粒和慢病毒包裝載體轉染細胞后獲得；過表達PTGS2的重組質粒由擴增PTGS2前引物序列和后引物序列、以及空質粒載體Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin制得。