[發明專利]一種D-二聚體檢測試劑盒、制備方法及用途

在審

• 申請號: 202010115874.7
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN113376378A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 鄧怡;張瑞;石曉強;徐建新;李福剛
• 申請（專利權）人: 上海奧普生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明涉及一種D?二聚體檢測試劑盒、制備方法及用途。本發明的所述試劑盒包括：包被于磁性微球的第一株抗體、標記有示蹤標記物的第二株抗體和校準品；所述第一株抗體和所述第二株抗體所識別的D?二聚體的特異性結合位點不同；所述校準品包括含牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽溶液。該試劑盒具有良好的靈敏度和特異性，反應時間短，能夠快速得到檢測結果，陰性符合率高，穩定性高，結合化學發光儀器可以實現快速自動化檢測。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，具體涉及一種D-二聚體檢測試劑盒、制備方法及用途。

背景技術

D-二聚體(D-Dimer，DD)是纖維蛋白單體經活化因子XIII交聯后，再經纖溶酶水解所產生的一種特異性降解產物，是一個特異性的纖溶過程標記物。D-二聚體來源于纖溶酶溶解的交聯纖維蛋白凝塊。近十多年來，國內外的研究證實D-二聚體檢測已成為臨床診斷血栓性疾病的重要指標，主要用于篩查深靜脈血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、彌漫性血管內凝血(DIC)。另外，只要機體血管內有活化的血栓形成及纖維溶解活動，D-二聚體就會升高，因此，心肌梗死、腦梗死、手術、腫瘤、感染及組織壞死、腎臟疾病、器官移植排斥反應等均可導致D-二聚體升高。特別對老年人及住院患者，因患菌血癥等病易引起凝血異常而導致D-二聚體升高。D-二聚體檢測不僅對多種疾病的輔助診斷具有重要的臨床意義，也具備巨大的市場前景。

目前，D-二聚體的免疫檢測方法有多種，其中包括放射性同位素免疫分析法(RIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)、膠體金免疫層析法(GICA)、熒光免疫層析法(FICA)、膠乳增強免疫比濁法(PETIA)及近年來逐漸被廣泛使用的化學發光法(CLIA)等。

放射性同位素免疫分析法(RIA)是利用同位素標記的與未標記的抗原同抗體發生競爭性抑制反應的放射性同位素體外微量分析方法。但是放射性同位素免疫分析法(RIA)有時會出現交叉反應、假陽性反應，組織樣品處理不夠迅速，不能滅活降解酶和鹽及pH有時會影響結果等問題。

酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測原理，以雙抗體夾心法為例，是在固相載體上包被一種特異性抗體，加入待測樣本后，再加入酶標記的另一種抗體，形成雙抗體夾心復合物，再通過發光底物的顯色作用，使儀器可以定量檢測出的免疫反應。但酶聯免疫吸附法(ELISA)操作繁瑣時間長、靈敏度低、線性范圍窄和自動化程度低。

膠體金免疫層析法(GICA)作為POCT檢驗的一種方法，具有上樣量少、簡便快速的優點，適用于床旁檢驗。其原理如下，仍以雙抗體夾心法為例，當含有抗原的樣本滴加到吸收孔后，抗原先與膠體金標記的抗體結合形成抗原-抗體復合物，然后固定在樣品墊上的另一種抗原會捕獲該復合物，形成雙抗體夾心復合物，并產生一個色帶，而被檢測到的免疫檢測法。不過膠體金免疫層析法在靈敏度、線性范圍、定量準確度等方面還有待改進。

熒光免疫層析法(FICA)相比于傳統的免疫層析法區別在于以熒光微球代替膠體金作為抗體載體，既保留了傳統膠體金層析試紙條的現場快速檢測優點，又加入了熒光檢測技術的高靈敏度特點，提高免疫層析方法檢測性能。但熒光免疫層析法存在自動化程度低、檢測通量較小的缺點。

膠乳增強免疫比濁法(PETIA)，傳統的免疫比濁法基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。膠乳增強免疫比濁法是在傳統免疫比濁基礎上，將抗體標記在乳膠微球上使抗原抗體結合物的體積增大，光通過之后，透射光和散射光的強度變化更為顯著，從而提高試驗的敏感性。膠乳增強免疫比濁法(PETIA)則存在檢測靈敏度不高，線性范圍較窄等缺點。