[發(fā)明專利]菌液直接PCR檢測摩根氏菌的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010114819.6
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111187771A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉建柱;張美華;劉永夏;韓博;才冬杰;左之才;鄧干臻;李克鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

1.一組引物對，其特征在于，所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.權(quán)利要求1所述的引物對在制備檢測摩根氏菌的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

3.一種檢測摩根氏菌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權(quán)利要求1所述的的引物對。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括：PCR Mix和ddH₂O。

5.權(quán)利要求3或4所述的試劑盒在如下(1)或(2)中的應(yīng)用：

(1)對摩根氏菌進(jìn)行耐藥性研究；

(2)開發(fā)治療摩根氏菌引起的感染的藥物。

6.利用權(quán)利要求3或4所述的試劑盒檢測摩根氏菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

從待測樣本中提取細(xì)菌并制備成菌懸液，以菌懸液作為模板，構(gòu)建PCR反應(yīng)體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增；將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測，若擴(kuò)增出857bp的條帶，則表明待測樣本中含有摩根氏菌；若擴(kuò)增不出857bp的條帶，則表明待測樣本中不含有摩根氏菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，從待測樣本中提取細(xì)菌并制備成菌懸液的方法為：將待測樣本用無菌水稀釋，過濾，將濾液進(jìn)行離心處理，離心轉(zhuǎn)速為3000r/mi n，離心時(shí)間為5min，離心后棄去上清，用無菌PBS緩沖液重懸。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)體系包括：PCR Mix 25μL，菌懸液5μL，SEQ ID NO.1所示的引物1μL，SEQ ID NO.2所示的引物1μL，d dH₂O 18μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，PCR擴(kuò)增的條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s、50℃退火30s、72℃延伸90s，32個(gè)循環(huán)；72℃保溫10min。