[發明專利]菌液直接PCR檢測摩根氏菌的方法

在審

• 申請號: 202010114819.6
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111187771A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 劉建柱;張美華;劉永夏;韓博;才冬杰;左之才;鄧干臻;李克鑫
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發明公開了一種菌液直接PCR檢測摩根氏菌的方法，包括如下步驟：從待測樣本中提取細菌并制備成菌懸液，以菌懸液作為模板，構建PCR反應體系進行PCR擴增；將PCR擴增產物進行凝膠電泳檢測，若擴增出857bp的條帶，則表明待測樣本中含有摩根氏菌；若擴增不出857bp的條帶，則表明待測樣本中不含有摩根氏菌。本發明直接以經處理得到的菌懸液為模板對摩根氏菌進行PCR檢測，省去了繁瑣的DNA提取步驟，簡化了PCR檢測的步驟，節省了人力物力，大大降低了檢測成本。

技術領域

本發明涉及細菌分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種菌液直接PCR檢測摩根氏菌的方法。

背景技術

摩氏摩根菌(Morganella morganii)屬于摩根菌屬，摩根菌屬只有摩氏摩根菌一個種。摩氏摩根菌呈革蘭氏陰性，直桿菌，條件性致病菌。在普通瓊脂平板，麥康凱瓊脂平板和肉湯培養基中均可生長。普通瓊脂平板上為光滑、濕潤、邊緣整齊的圓形菌落。該菌株葡萄糖、甘露糖、苯丙氨酸、尿素酶、鳥氨酸陽性，鼠李糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、麥芽糖、甘露醇、肌醇、VP為陰性。對于丁胺卡那高度敏感，對頭孢曲松，呋喃唑酮為中度敏感，對恩諾沙星、環丙沙星、利福平為耐藥。一般存在于人和動物的糞便、尿道和傷口中，能夠引起傷口和泌尿道感染，嚴重者現已出現死亡病例的報道。

近年來，由摩氏摩根菌引起的感染呈逐漸增加的趨勢，但摩氏摩根菌難以進行分離，其臨床分離率在國內僅為革蘭氏陰性菌的0.5％，因此，目前對于摩氏摩根菌的研究還比較少。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種菌液直接PCR檢測摩根氏菌的方法。該方法能夠實現對摩根氏菌的快速、靈敏和特異性檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一組引物對，所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；具體如下：

F：5’-ATGCATTATGATACCCATCAGA-3’；(SEQ ID NO.1)

R：5’-TCATTCACCCTTATGAAAGA-3’；(SEQ ID NO.2)

本發明的第二方面，提供上述引物對在制備檢測摩根氏菌的試劑或試劑盒中的應用。

本發明的第三方面，提供一種檢測摩根氏菌的試劑盒，所述試劑盒中含有上述的引物對。

進一步的，所述試劑盒中還包括：PCR Mix和ddH₂O。

本發明的第四方面，提供上述試劑盒在如下(1)或(2)中的應用：

(1)對摩根氏菌進行耐藥性研究；

(2)開發治療摩根氏菌引起的感染的藥物。

本發明的第五方面，提供一種利用上述試劑盒檢測摩根氏菌的方法，包括如下步驟：

從待測樣本中提取細菌并制備成菌懸液，以菌懸液作為模板，構建PCR反應體系進行PCR擴增；將PCR擴增產物進行凝膠電泳檢測，若擴增出857bp的條帶，則表明待測樣本中含有摩根氏菌；若擴增不出857bp的條帶，則表明待測樣本中不含有摩根氏菌。

優選的，從待測樣本中提取細菌并制備成菌懸液的方法為：將待測樣本用無菌水稀釋，過濾，將濾液進行離心處理，離心轉速為3000r/min，離心時間為5min，離心后棄去上清，用無菌PBS緩沖液重懸。

優選的，所述菌懸液的OD值為0.1-0.15。

優選的，所述PCR反應體系包括：PCR Mix 25μL，菌懸液5μL，SEQ ID NO.1所示的引物1μL，SEQ ID NO.2所示的引物1μL，ddH₂O 18μL。