[發明專利]一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針及制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010114439.2
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111303119A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 闞偉;杜佳慧;尹浩純;孔祥東;趙冰;李安然;王麗艷;宋波
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: C07D401/12
• 分類號: C07D401/12;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 王艷萍

一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針及制備方法和應用，它涉及血藍蛋白熒光探針及制備方法和應用。它是要解決現有的血藍蛋白檢測方法存在的適用范圍窄、步驟繁瑣的技術問題。本發明的一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針的結構式為：制法：將2?(2?羥基?4?氨基苯基)菲并咪唑和吡啶?2?甲醛加入到有機溶劑中反應，然后將析出的固體過濾、洗滌、重結晶，得到基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針。該基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針用于溶液中血藍蛋白的檢測。既可“裸眼”檢測溶液中血藍蛋白，又可以用熒光法定性或定性檢測溶液中血藍蛋白。合成方法簡單，原料易得，產率高，可用于生態環境和生物體內血藍蛋白檢測領域。

技術領域

本發明屬于蛋白分析領域，涉及一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針及檢測方法。

背景技術

蛋白質(protein)是生命的物質基礎，是構成細胞的基本有機物和生命活動的主要承擔者。有機體中的每一個細胞和所有重要組成部分都有蛋白質參與，使得生命及各種形式的生命活動緊密聯系在一起。生物體內蛋白質的種類很多，性質、功能各異，但都是由20多種氨基酸(Amino acid)按不同比例組合而成的，并在體內不斷進行代謝與更新。

其中血藍蛋白又稱血藍素，是一種含銅蛋白，在生物體內承擔多種功能，發揮了巨大的作用。一個氧分子與兩個銅離子進行結合之后使得血藍蛋白呈現藍色，銅處于酶活性中心，是氧化還原反應的反應物以及生成物，也是載氧和傳遞電子的重要工具，同時還可以作為鐵代謝的輔助。血藍蛋白存在于軟體動物和節肢動物體內，主要功能為載氧，與能量的貯存、滲透壓的維持及蛻皮過程的調節有關。血藍蛋白同時具有多種生物功能，包括：布朗寧、傷口愈合、免疫防御和硬化。血藍蛋白具有廣譜抗細菌、真菌、病毒功能及獨特的作用機理，有可能成為抗菌、抗病毒及抗腫瘤藥物的新來源。開發和利用海洋動物血藍蛋白資源，將為研制抗菌新藥提供理想分子設計骨架和模板，為發展新的抗感染藥物奠定重要基礎。所以，檢測生態環境和生物體內的血藍蛋白具有重要的意義。

目前檢測血藍蛋白采用的方法為紫外光比色皿法、酶聯免疫吸咐試驗法。紫外光比色皿法是利用紫外分光光度計及比色皿進行測試，它對被測樣品的要求較高，不適于成分復雜的樣品，檢測精度低。而酶聯免疫吸咐試驗法要經過包被、孵育、與抗體結合等步驟才能測量，測試步驟繁瑣。

利用檢測Cu²⁺的熒光探針來檢測血藍蛋白可以提高檢測效率。

申請號為201810613048.8的中國專利公開了一種檢測Cu²⁺的熒光探針，該探針的結構式為但是該探針的發射波長是400nm，而血藍蛋白本身的發射是380nm，探針與血藍蛋白的發射波長部分重合，無法實現對血藍蛋白的檢測。

申請號為201710106165.0的中國專利公開了一種用于Cu²⁺檢測的菲并咪唑可逆熒光探針，該熒光探針的結構式為該熒光探針能選擇性識別Cu²⁺，但是該熒光探針檢測Cu²⁺時是使熒光強度萃滅，只適合定性檢測，無法進行定量檢測。

發明內容

本發明是要解決現有的血藍蛋白檢測紫外光比色皿法適用范圍窄、酶聯免疫吸咐試驗法步驟繁瑣、熒光探針法無法檢測或無法定量檢測的技術問題，而提供一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針及制備方法和應用。

本發明的一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針，其結構式為：

上述的一種基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針的制備方法，按以下步驟進行：

將2-(2-羥基-4-氨基苯基)菲并咪唑和吡啶-2-甲醛的物質的量比為1：(1～3)的比例加入到有機溶劑Ⅰ中，在溫度為20～80℃的條件下反應1～5h，反應過程中有固體析出；反應結束后，過濾，依次用有機溶劑Ⅱ和蒸餾水洗滌濾餅，濾餅干燥后得到粗產物；將粗產物用有機溶劑Ⅲ重結晶，得到基于菲并咪唑的血藍蛋白熒光探針。