[發(fā)明專利]新型冠狀病毒的人源單克隆抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010114282.3
• 申請(qǐng)日: 2020-02-24
• 公開（公告）號(hào): CN113292649B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王奇慧;嚴(yán)景華;史瑞;高福;馬素芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本發(fā)明涉及一種新型冠狀病毒的人源單克隆抗體及其應(yīng)用。該抗體能夠特異性結(jié)合2019?nCoV RBD，阻斷2019?nCoV RBD與ACE2結(jié)合，抑制2019?nCoV感染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高中和活性的新型冠狀病毒 (2019-nCoV)人源單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒2019-nCoV作為新發(fā)的突發(fā)傳染病病原，目前還沒有針對(duì)該病毒的特效藥物獲批上市。

治療性抗體藥物不但在腫瘤和自身免疫疾病方面占有重要地位，在傳染性疾病的治療中也同樣有效。目前已經(jīng)上市的治療和預(yù)防病毒感染的藥物有預(yù)防小兒呼吸道合胞病毒(RSV)感染的帕利珠單抗(Synagis)，治療 HIV感染的艾巴利珠單抗(Trogarzo)，以及用于狂犬病毒暴露后預(yù)防的 Rabishield。同時(shí)還有針對(duì)眾多病毒的單克隆抗體處于臨床研究的不同階段 (https：//clinicaltrials.gov/)。

2019-nCoV屬于冠狀病毒。同屬冠狀病毒的重癥急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)以及中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)也曾在分別在2002-2003年和2012年引發(fā)疫情。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì) SARS-CoV共引發(fā)8000人感染，794人死亡(https：//www.who.int/)。自 2012年至今，MERS-CoV感染病毒病例在持續(xù)增加，截至2019年底，全球確診2499例感染病例，861例死亡病例。2020年1月12日，世界衛(wèi)生組織正式命名了“2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)”，其后在2020年2 月11-12日國際病毒分類委員會(huì)(International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV)宣布，新型冠狀病毒(2019-nCoV)的正式分類名為嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2， SARS-CoV-2)，世界衛(wèi)生組織(WHO)同日在日內(nèi)瓦舉辦全球研究和創(chuàng)新論壇上宣布，由這一病毒導(dǎo)致的疾病的正式名稱為“COVID-19”。

病毒要感染細(xì)胞，首先需要通過囊膜蛋白結(jié)合宿主的受體。抗體，尤其是中和活性抗體，通過結(jié)合到囊膜蛋白上，阻斷病毒與細(xì)胞受體的結(jié)合，從而阻斷病毒感染。同時(shí)，抗體結(jié)合到囊膜蛋白上，從而對(duì)游離的病毒或是被感染的細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，通過抗體的Fc區(qū)募集巨噬細(xì)胞或是補(bǔ)體等免疫細(xì)胞和免疫分子，從而清除游離的病毒以及被感染的細(xì)胞。因此，靶向受體結(jié)合區(qū)(RBD)的抗體，不但具有中和病毒感染的活性，還可以通過 Fc區(qū)發(fā)揮作用，促進(jìn)病毒以及被感染細(xì)胞的清除。

基于對(duì)其它冠狀病毒，尤其是SARS-CoV和MERS-CoV的研究，與受體結(jié)合的重要囊膜蛋白是刺突蛋白(S)。S可進(jìn)一步分為S1和S2兩部分。S2的作用是介導(dǎo)膜融合。S1的N端(NTD)和C端(CTD)都可能是RBD。通過對(duì)2019-nCoV的研究，團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)CTD是此冠狀病毒的RBD，結(jié)合受體ACE2。因此靶向RBD的抗體，并且是阻斷S與ACE2結(jié)合的抗體，可能成為抑制病毒感染的中和抗體。本發(fā)明的目的是針對(duì)2019-nCoV，鑒定特異的具有保護(hù)效果的人源中和抗體。

發(fā)明內(nèi)容

為了獲得具有保護(hù)效果的人源中和抗體，本發(fā)明首先以昆蟲細(xì)胞表達(dá)的2019-nCoV RBD作為抗原，通過流式分選，從2019-nCoV RBD感染后痊愈出院人員的PBMCs中篩選到可以特異結(jié)合2019-nCoV RBD蛋白的記憶B細(xì)胞，然后對(duì)篩選的單一B細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR，獲得抗體的可變區(qū)序列與片段，并進(jìn)一步與恒定區(qū)連接至表達(dá)載體中。經(jīng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)、純化后，進(jìn)行一系列的功能檢測(cè)，包括與2019-nCoV RBD蛋白的結(jié)合能力，阻斷2019-nCoVRBD與ACE2結(jié)合的阻斷效果，抑制2019-nCoV感染的中和效果等，獲得了中和2019-nCoV感染的人源單克隆抗體，命名為 GH4。

具體地，本發(fā)明通過以下方面實(shí)現(xiàn)。