[發明專利]定量檢測蒼白桿菌的聚合酶鏈式反應引物、試劑盒和定量檢測蒼白桿菌的方法

在審

• 申請號: 202010114190.5
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111254208A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 黃婕;吉鴻睿;金龍;史宏偉;張治洲
• 申請（專利權）人: 威海以琳生物制品有限公司;哈爾濱工業大學（威海）
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

1.定量檢測蒼白桿菌的聚合酶鏈式反應引物對，包括上游引物和下游引物，所述上游引物具有如OA3F所示核苷酸序列，所述下游引物具有如OA3R所示核苷酸序列：

OA3F:5'-CAACGGGAACCAGTCGAAGAACGAGCCGCC-3'

OA3R:5'-TCAAGGAAAAGATGCCGGTTTCAATCTCGC-3'。

2.權利要求1所述聚合酶鏈式反應引物對在檢測蒼白桿菌中的應用。

3.檢測蒼白桿菌的PCR試劑盒，包括：NPK02 buffer(2×)、特異性引物對、Taq酶和ddH₂O；所述特異性引物對為權利要求1所述定量檢測蒼白桿菌的聚合酶鏈式反應引物對。

4.根據權利要求3所述的PCR試劑盒，其特征在于，所述特異性引物的終濃度為1～3μM。

5.采用權利要求3或4所述PCR試劑盒檢測蒼白桿菌的反應體系：包括NPK02 buffer(2×)6μL，特異性引物各1.5μL，DNA模板1μL，Taq酶0.3μL，ddH₂O 3.2μL；所述特異性引物的終濃度為1～3μM，所述DNA模板的濃度為10ng/μL。

6.采用權利要求5所述反應體系檢測蒼白桿菌的方法：包括以下步驟：

以提取得到的待測樣品的宏基因組DNA為模板，將所述反應體系進行PCR擴增，得到PCR擴增產物，所述PCR擴增的反應程序為：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃1min，37個循環；72℃1.5min；

將所述PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

7.檢測蒼白桿菌的QPCR試劑盒，包括2×NPK62 Buffer，特異性引物對和Taq酶，所述特異性引物為權利要求1所述引物對。

8.根據權利要求7所述的QPCR試劑盒，其特征在于，所述特異性引物中的上下游引物各自終濃度為1～3μM。

9.采用權利要求7或8所述QPCR試劑盒檢測蒼白桿菌的反應體系，包括2×NPK62Buffer 6μL，特異性引物各1.5μL，DNA模板4.25μL，Taq酶0.25μL，所述特異性引物中的上下游引物各自終濃度為1～3μM，所述DNA模板的濃度為10ng/μL。

10.采用權利要求9所述反應體系定量檢測蒼白桿菌的方法，包括以下步驟：

以提取到的待測樣品的宏基因組DNA為模板，將所述反應體系進行QPCR擴增，所述QPCR擴增的反應程序為：95℃4min；95℃30s，60℃40s，72℃40s，42個循環；72℃2min；

根據預定的標準原液的濃度與所述QPCR擴增的結果，得到待測樣品中蒼白桿菌的含量。