[發(fā)明專利]基于lacZ基因和pUC復(fù)制子的原核啟動子報告系統(tǒng)及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010113295.9
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111235172B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 付立霞;徐敬瀟;楊輝;黃志斌;龔建森;韓先干
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/65;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種基于lacZ基因和pUC復(fù)制子的原核啟動子報告系統(tǒng)，其特征在于，所述報告系統(tǒng)包括源自于pFLX107的pUC復(fù)制子，氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因，核糖體RNA操縱子T1T2終止子，lambda t0轉(zhuǎn)錄終止子，以及源自于質(zhì)粒pRCL且內(nèi)部ClaI、SacI和NdeI位點被沉默突變的lacZ基因，緊鄰lacZ基因上游的啟動子探測區(qū)域含有SphI，PstI，EcoRI，XhoI，KpnI，SacI，SpeI和BglII多克隆位點，所述lambda t0轉(zhuǎn)錄終止子位于多克隆位點前；所述基于lacZ基因和pUC復(fù)制子的原核啟動子報告系統(tǒng)為質(zhì)粒pFGH06，所述質(zhì)粒pFGH06的核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

2.權(quán)利要求1所述的原核啟動子報告系統(tǒng)的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）通過定點突變將lacZ基因中的ClaI、SacI和NdeI位點消除，并克隆至質(zhì)粒pFLX107中啟動子pR后的BglII和Xba I酶切位點之間，構(gòu)建成含報告基因lacZ的重組質(zhì)粒pFLX107-lacZ；

2）通過設(shè)計合成含有不同多克隆位點的序列將質(zhì)粒pFLX107-lacZ中l(wèi)acZ前的啟動子pR及其調(diào)控元件cI857置換，構(gòu)建出基于lacZ和pUC復(fù)制子的啟動子報告系統(tǒng)；所述基于lacZ基因和pUC復(fù)制子的原核啟動子報告系統(tǒng)為質(zhì)粒pFGH06，所述質(zhì)粒pFGH06的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.含有權(quán)利要求1所述的原核啟動子報告系統(tǒng)的重組菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組菌，所述重組菌為大腸桿菌。

5.權(quán)利要求3所述的重組菌的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：將原核啟動子報告系統(tǒng)通過熱激轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中即得。

6.權(quán)利要求1所述的原核啟動子報告系統(tǒng)或權(quán)利要求3或4所述的重組菌在誘導(dǎo)性啟動子和/或組成型啟動子的克隆和/或目標啟動子篩選中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述誘導(dǎo)性啟動子為araBAD，所述組成型啟動子為rpsM。