[發明專利]基于表面增強拉曼光譜的羥基山椒素快速檢測方法

有效

• 申請號: 202010112255.2
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111220592B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發明（設計）人: 孫曉霞;鄒小波;張迪;趙鐳;史波林;石吉勇;孫悅;魏曉鷗
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于表面增強拉曼光譜的羥基山椒素快速檢測方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)繪制羥基山椒素標準曲線：

首先制備不同濃度的羥基-α-山椒素標準溶液，然后分別取不同濃度的羥基-α-山椒素標準溶液，體積均相同，記為V₁；然后取與羥基-α-山椒素標準溶液相同數量的SERS基底材料的懸液，體積均相同，記為V₂；再取相同數量的無機鹽凝聚劑，體積均相同，記為V₃；

最后將羥基-α-山椒素標準溶液、SERS基底材料的懸液和無機鹽凝聚劑分別混合，渦旋混合均勻，利用拉曼光譜儀進行光譜掃描獲得拉曼光譜圖，并對其進行譜峰歸屬和解析；拉曼光譜圖進行預處理后，以1620～1650cm^-1處的特征拉曼峰作為定量基準峰，測定定量基準峰位移處的拉曼峰強度值I，以羥基-α-山椒素標準溶液濃度與其相對應的拉曼峰強度值I繪制標準曲線；

所述SERS基底材料為聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料；所述SERS基底材料的懸液為聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料與超純水的混合物；懸液中聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料質量比w/v為10％-40％；

聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料的具體制備過程如下：

a、制備三角形銀納米粒子：將5mL濃度為的2.5nM檸檬酸三鈉、200μL濃度為500mg/L的聚乙二醇、300μL濃度為10mM的硼氫化鈉與5mL濃度為0.5mM硝酸銀混合，并在磁力攪拌下保持3分鐘，得到的混合液作為種子溶液；將20-500μL的種子溶液與75μL濃度為10mM抗壞血酸混合，并在攪拌條件下加入3mL濃度為0.5mM的硝酸銀，最后添加500μL濃度為25mM的檸檬酸三鈉，得到三角形銀納米粒子；

b、制備rGO-p：將石墨薄片氧化，通過超聲處理30分鐘將所得的氧化石墨烯分散在N，N-二甲基甲酰胺溶劑中，得到GO的棕色均勻懸浮液，濃度為1mg/mL；基于聚乙烯吡咯烷酮與氧化石墨烯重量比為5：1，加入聚乙烯吡咯烷酮并將其溶解在GO的棕色均勻懸浮液中，并超聲處理1-2h，得到PVP化學修飾的還原氧化石墨烯，記為rGO-p；

c、制備聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料：將聚苯酚溶解在60℃的DMF中，形成透明均勻的溶液，然后將其與rGO-p溶液混合，攪拌2小時后，再加入預先制備的三角形銀納米粒子，超聲攪拌后，在25-30℃的水浴中靜置2-5h；然后通過離心洗滌，其中離心速度為6000-9000r/min，離心時間為8-20min；最后收集離心產物，經干燥得到聚苯酚/氧化石墨烯三角形銀納米復合材料；

(2)待測樣品溶液的制備：

以花椒為原料，除去萎蔫或褐變的干燥花椒果皮，粉碎，經篩網篩選，得到花椒粉；稱取花椒粉，質量為w，加入乙酸乙酯，震蕩搖勻，常溫條件下進行超聲浸提，得到粗提液；將粗提液進行離心，收集上清液，過濾后得到待測液，記錄體積V₀，冷藏待用；整個步驟在避光條件下操作；所述花椒粉與乙酸乙酯的用量比為(1-25g)：(25-100)mL；所述超聲浸提時間為5-40min；

(3)待測液的拉曼檢測：

取V₁體積步驟(2)制備得到的待測液加入到含有SERS基底材料的懸液中，含有SERS基底材料的懸液的體積為V₂，再加入無機鹽凝聚劑，無機鹽凝聚劑的體積為V₃，渦旋混合均勻，利用拉曼光譜儀進行光譜掃描獲得拉曼光譜圖；

(4)定性判斷：

對步驟(3)得到的拉曼光譜圖進行預處理后，當譜圖中1140～1190cm^-1，1250～1270cm^-1，1440～1470cm^-1，1620～1650cm^-1處存在特征拉曼峰時，則待測液中含有羥基山椒素；

(5)定量測定：

在步驟(4)檢測結果的基礎上，根據步驟(3)得到的待測液的拉曼光譜圖，以1620～1650cm^-1處的特征拉曼峰作為定量基準峰，測定定量基準峰位移處的拉曼峰強度值，并根據步驟(1)得到的羥基-α-山椒素標準曲線得到的待測液中總羥基山椒素的濃度，記為m，進一步根據公式計算出花椒樣品中總羥基山椒素的含量X；

X：花椒樣品中總羥基山椒素的含量，mg/g；

m：根據標準曲線得到的待測液中總羥基山椒素的濃度，mg/L；

V₀：待測液體積，L；

w：花椒樣品質量，g。