[發明專利]引物對及其應用以及特異性檢測動物雙歧桿菌的試劑盒和方法

在審

• 申請號: 202010111292.1
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111139308A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 金君華;任培豪;張紅星;謝遠紅;劉慧
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;劉依云

本發明涉及分子生物學領域，具體涉及引物對及其應用以及特異性檢測動物雙歧桿菌的試劑盒和方法。該引物對包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。通過上述技術方案，本發明實現了對動物雙歧桿菌的定性和定量鑒定，且本發明提供的引物對和試劑盒能夠特異性地檢測動物雙歧桿菌，為動物雙歧桿菌的進一步研究提供了技術支持。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地，涉及一種引物對，該引物對在特異性檢測動物雙歧桿菌中的應用，一種用于特異性檢測動物雙歧桿菌的試劑盒，以及一種定性或定量檢測待測樣本中動物雙歧桿菌的方法。

背景技術

1986年版伯杰氏細菌學鑒定手冊將雙歧乳桿菌屬分為24種。而目前隨著分子生物學的發展，細菌分類學發生了顯著的變化，從基因水平對細菌種類的鑒定成為最精準可靠的辦法，根據DNA的同源性鑒定，雙歧桿菌達到32種之多。

動物雙歧桿菌是人和許多哺乳動物腸道中的優勢菌之一，1899年法國巴斯德研究院的蒂瑟爾(Tissier)首次從母乳喂養的嬰兒大便中分離到了該菌，并指出它對乳兒的營養和預防腸道疾病具有重要作用。該菌是人和動物腸道中重要的生理性細菌。參與免疫、營養、消化和保護等一系列的生理過程，發揮著重要的功能。

目前已經有多位學者成功設計了特異性引物對以對目標菌屬以及菌種進行了鑒定，如乳桿菌屬、梭菌屬、普雷沃菌屬、擬桿菌屬、短雙歧桿菌菌種、鼠李糖乳桿菌種。但尚無針對動物雙岐菌種進行特異性鑒定。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術中尚無針對動物雙岐菌種進行特異性鑒定的缺陷，提供一種用于特異性鑒定動物雙歧桿菌的引物對，該引物對在特異性檢測動物雙歧桿菌中的應用，一種用于特異性檢測動物雙歧桿菌的試劑盒，以及一種定性或定量檢測待測樣本中動物雙歧桿菌的方法。本發明提供的引物對能夠特異性地對動物雙歧桿菌進行鑒定。

為了實現上述目的，本發明一方面提供一種引物對，該引物對包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

本發明第二方面提供了如上所述的引物對在特異性檢測動物雙歧桿菌中的應用。

本發明第三方面提供了一種用于特異性檢測動物雙歧桿菌的試劑盒，所述試劑盒含有PCR擴增試劑和引物對，所述引物對為如上所述的引物對。

本發明第四方面提供了一種定性檢測待測樣本中動物雙歧桿菌的方法，該方法包括：在能夠進行PCR擴增的條件下，使用如上所示的引物對對所述待測樣品進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物，并對所述擴增產物進行電泳；

若出現目標條帶，則判斷所述待測樣本中存在動物雙歧桿菌，若未出現目標條帶，則判斷所述待測樣本中不存在動物雙歧桿菌。

本發明第五方面提供了一種定量檢測待測樣本中動物雙歧桿菌的方法，該方法包括：在能夠進行PCR擴增的條件下，使用如上所示的引物對對所述待測樣品進行實時定量PCR檢測，進而獲得所述待測樣本中動物雙歧桿菌的含量。

通過上述技術方案，本發明實現了對動物雙歧桿菌的定性和定量鑒定，且本發明提供的引物對和試劑盒能夠特異性地檢測動物雙歧桿菌，為動物雙歧桿菌的進一步研究提供了技術支持。

本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發明，但并不構成對本發明的限制。

圖1為使用本發明引物對和參照引物對對A12進行擴增的電泳圖；其中，M為MAKER，分子量由上到下為最大到最小，大小為500bp-50bp；泳道1、2、3、4、5、6、7、8、a、b、c、d、e、f、g、h、i為對應編號的引物對。