[發(fā)明專利]引物對(duì)及其應(yīng)用以及特異性檢測(cè)動(dòng)物雙歧桿菌的試劑盒和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010111292.1
• 申請(qǐng)日: 2020-02-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111139308A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金君華;任培豪;張紅星;謝遠(yuǎn)紅;劉慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京潤(rùn)平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;劉依云

1.一種引物對(duì)，其特征在于，該引物對(duì)包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

2.權(quán)利要求1所述的引物對(duì)在特異性檢測(cè)動(dòng)物雙歧桿菌中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中，所述動(dòng)物雙歧桿菌為動(dòng)物雙歧桿菌A12(Bifidobacterium animalis A12)，該菌株保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No.17308。

4.一種用于特異性檢測(cè)動(dòng)物雙歧桿菌的試劑盒，所述試劑盒含有PCR擴(kuò)增試劑和引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)為權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還含有DNA提取試劑。

6.一種定性檢測(cè)待測(cè)樣本中動(dòng)物雙歧桿菌的方法，其特征在于，該方法包括：在能夠進(jìn)行PCR擴(kuò)增的條件下，使用權(quán)利要求1所示的引物對(duì)對(duì)所述待測(cè)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，并對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳；

若出現(xiàn)目標(biāo)條帶，則判斷所述待測(cè)樣本中存在動(dòng)物雙歧桿菌，若未出現(xiàn)目標(biāo)條帶，則判斷所述待測(cè)樣本中不存在動(dòng)物雙歧桿菌。

7.一種定量檢測(cè)待測(cè)樣本中動(dòng)物雙歧桿菌的方法，其特征在于，該方法包括：在能夠進(jìn)行PCR擴(kuò)增的條件下，使用權(quán)利要求1所示的引物對(duì)對(duì)所述待測(cè)樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)，進(jìn)而獲得所述待測(cè)樣本中動(dòng)物雙歧桿菌的含量。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，所述檢測(cè)待測(cè)樣本中動(dòng)物雙歧桿菌的含量在10⁵-10¹⁰CFU/g之間。

9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，所述PCR擴(kuò)增的條件包括：

先將PCR擴(kuò)增體系在93-95℃下預(yù)變性2-5min；

然后在如下的程序下進(jìn)行30-40次循環(huán)：

93-95℃變性25-35s，57-58.5℃退火8-12s，70-75℃延伸18-22s；

最后70-75℃延伸3-10min。

10.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，對(duì)所述待測(cè)樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增的擴(kuò)增體系包括：以20μL所述擴(kuò)增體系計(jì)，待測(cè)樣本的量為0.5-1.5μL，SEQ ID NO:1所示的正向引物的量為0.5-1.5μL，SEQ ID NO:2所示的反向引物的量為0.5-1.5μL，DNA聚合酶預(yù)混液的量為8-12μL。