[發(fā)明專利]一種檢測替諾呋韋中基因毒性雜質(zhì)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010111235.3
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111239286B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉宇晶;利虔;趙小君;薛燕;諶宗永
• 申請（專利權(quán)）人: 北京陽光諾和藥物研究有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 吳愛琴

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測替諾呋韋(PMPA)中基因毒性雜質(zhì)的方法。本發(fā)明通過高效液相色譜法在合適的條件下檢測替諾呋韋(PMPA)中四種基因毒性雜質(zhì)SM?A3、4?甲基苯磺酸乙酯、SM?A4和(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基?4?甲苯磺酸酯。本發(fā)明使用上述技術(shù)方案可以大大提高檢測方法的靈敏度，設(shè)備儀器均為通用的，檢測成本低廉，操作極為簡便，大大節(jié)約了檢測成本和檢測時間。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測替諾呋韋(PMPA)中基因毒性雜質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

丙酚替諾呋韋(Tenofovir alafenamide fumarate，化合物II)和富馬酸替諾福韋二吡呋酯(Tenofovir disoproxil fumarate，化合物III)都是治療乙肝的一線藥物，其關(guān)鍵中間體均為替諾呋韋(PMPA)

專利WO2013052094(A1)揭示了由PMPA制備丙酚替諾呋韋的過程。

文獻(xiàn)“富馬酸替諾福韋二吡呋酯的合成工藝”(張奇等，沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2018年07期，P543-547)報道了由PMPA制備富馬酸替諾福韋二吡呋酯的過程。

目前比較主要的PMPA合成路線，如文獻(xiàn)“富馬酸替諾福韋二吡呋酯的合成工藝”(張奇等，沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2018年07期，P543-547)中所揭示的。

以SM-A0((R)-4-甲基-1,3-二氧戊環(huán)-2-酮)和SM-A1(6-氨基嘌呤)為起始原料，對接生成SM-A2((R)-9-(2-羥基丙基)腺嘌呤)；SM-A2和SM-A3((二乙氧膦酰)甲基4-甲基苯磺酸)反應(yīng)生成SM-A4((R)-二乙基(((1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙基-2-基)氧)甲基)磷酸酯)；再進(jìn)行水解反應(yīng)生成PMPA(化合物I)。

基因毒性雜質(zhì)(genotoxic impurity,GTI)是指能直接或間接損害DNA，導(dǎo)致基因突變或具有致癌傾向的物質(zhì)，基因毒性雜質(zhì)在濃度很低時即可造成人體遺傳物質(zhì)的損傷，具有致突變性和致癌性，在用藥過程中嚴(yán)重威脅到人類的健康。

ICH Q11指出，在確定哪些生產(chǎn)步驟會影響原料藥雜質(zhì)譜時，應(yīng)首先識別出可能在生產(chǎn)工藝中生成或引入的致突變物質(zhì)，同時確定哪些步驟產(chǎn)生的致突變雜質(zhì)達(dá)到了影響原料藥雜質(zhì)譜的水平。然后結(jié)合ICH M7中的危害評估要素從3個方面來確定已知雜質(zhì)或潛在雜質(zhì)的致突變性:①原料藥中已經(jīng)確定的雜質(zhì)的致突變性。②可能影響原料藥雜質(zhì)譜的從市售化學(xué)品到原料藥的合成過程中所用的試劑、中間體的致突變性，以及起始原料之前步驟中的一些試劑、中間體的致突變性。③致突變物質(zhì)如果是市售化學(xué)品、合成中間體中的雜質(zhì)，或者是合成副產(chǎn)物，申請人應(yīng)使用基于風(fēng)險的推理來確定在哪些步驟應(yīng)該對此類潛在雜質(zhì)進(jìn)行危害性評估，如果確認(rèn)了合成過程中需要對這些雜質(zhì)和副產(chǎn)物進(jìn)行致突變性評估的步驟，則需要進(jìn)行風(fēng)險評估討論。

由此可見，對起始原料中引入的基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險評估，并采取必要的控制策略是藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵一環(huán)。又由于基因毒性雜質(zhì)的含量多為ppm級，對其進(jìn)行分析檢測要求極高的靈敏度，因而開發(fā)相應(yīng)的雜質(zhì)檢測技術(shù)勢在必行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對目前的技術(shù)空白，提供了一種替諾呋韋(PMPA)中基因毒性雜質(zhì)含量的檢測方法。

所述替諾呋韋(PMPA)中基因毒性雜質(zhì)包括SM-A3、SM-A4、(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯和4-甲基苯磺酸乙酯，具體結(jié)構(gòu)式如下所示：