[發明專利]一種檢測替諾呋韋中基因毒性雜質的方法

有效

• 申請號: 202010111235.3
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111239286B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 劉宇晶;利虔;趙小君;薛燕;諶宗永
• 申請（專利權）人: 北京陽光諾和藥物研究有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 吳愛琴

1.一種檢測替諾呋韋中基因毒性雜質含量的方法，所述替諾呋韋中基因毒性雜質包括SM-A3、SM-A4、(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯和4-甲基苯磺酸乙酯，結構式如下所示：

其特征在于：所述方法包括以如下分析方法1檢測SM-A3、SM-A4、4-甲基苯磺酸乙酯3個雜質的操作，以及以如下分析方法2檢測(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯的操作，

其中，所述分析方法1為：以SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和SM-A4作為對照品，采用高效液相色譜法檢測替諾呋韋中是否含有SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和SM-A4以及按外標法以峰面積計算各雜質的含量；

所述分析方法2為：以(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯作為對照品，采用高效液相色譜法檢測替諾呋韋中是否含有(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯以及按外標法以峰面積計算(乙氧基(羥基)磷酰基)甲基-4-甲苯磺酸酯雜質的含量；

所述分析方法1中，使用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀進行高效液相色譜法檢測；其中，檢測波長為225nm；

所述高效液相色譜法中，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱；

以體積比50:50的三氟乙酸水溶液-乙腈為流動相，其中，三氟乙酸水溶液的質量濃度為0.05％；流速為1.0±0.1ml/min；柱溫為35±5℃；

所述分析方法2中，使用具有紫外檢測器的高效液相色譜儀進行高效液相色譜法檢測；其中，檢測波長為200nm；

所述高效液相色譜法中，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱；

以體積比85:15的磷酸緩沖鹽水溶液-乙腈為流動相，其中，磷酸緩沖鹽水溶液為質量濃度為0.05mol/L的磷酸二氫鉀水溶液，以磷酸調節pH值至3.0；流速為1.0±0.1ml/min；柱溫為35±5℃。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法1中，所述高效液相色譜法中，所述色譜柱為MREDA 4.6×250mm，5μm型色譜柱。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法1的操作如下：

取替諾呋韋，加稀釋劑，超聲溶解，加水定量稀釋成每1ml中含2mg替諾呋韋的溶液，作為供試品溶液；

稱取SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和SM-A4對照品，用稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1ml中均含0.12μg的溶液，作為對照品溶液；

量取供試品溶液和對照品溶液各20μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；

得到的供試品溶液色譜圖中如有與SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和/或SM-A4保留時間一致的色譜峰，則按外標法以峰面積分別計算SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和/或SM-A4的含量；如沒有與SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和SM-A4保留時間一致的色譜峰，則判斷替諾呋韋樣品中不含SM-A3、4-甲基苯磺酸乙酯和/或SM-A4。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：替諾呋韋的保留時間為2.166min；

SM-A3的保留時間為7.580min；

4-甲基苯磺酸乙酯的保留時間為9.647min；

SM-A4的保留時間為14.055。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法2中，所述高效液相色譜法中，所述色譜柱為Agela 4.6×150mm，5μm型色譜柱。