[發明專利]MT2基因啟動子區甲基化用檢測引物與檢測方法以及應用

在審

• 申請號: 202010110282.6
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN111088350A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 王帆;康毅敏;李慧;劉彥隆;王鵬翔;李存保
• 申請（專利權）人: 內蒙古醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京華仁聯合知識產權代理有限公司 11588
• 代理人: 尹春雷

1.一種MT2基因啟動子區甲基化用檢測引物，其特征在于：包括用于MT2基因啟動子PCR擴增的上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列為：SEQ ID NO.1，所述下游引物的核苷酸序列為：SEQ ID NO.2。

2.一種MT2基因啟動子區甲基化用檢測方法，其特征在于：包括以下步驟：步驟1，采集抑郁癥患者靜脈血，提取基因組DNA；步驟2，重亞硫酸鹽處理DNA樣品，低速短暫離心備用；步驟3，以步驟2中的DNA為模板，使用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2為引物擴增MT2基因啟動子，獲得PCR擴增產物；步驟4，瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增成功的樣品；步驟5，將擴增成功的樣品進行SAP反應；步驟6，T切/RNase A消化反應；步驟7，樹脂純化；步驟8，芯片點樣；步驟9，將點樣后的芯片使用MALDI-TOF分析，計算出DNA樣品的甲基化程度。

3.如權利要求2所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：步驟1中采集抑郁癥患者的靜脈血和藥物治療后的靜脈血，分別提取基因組DNA，每種靜脈血至少提取兩個樣本。

4.如權利要求2所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：步驟3中使用的PCR反應組分還包括雙蒸水、10×PCR緩沖液、脫氧核苷、PCR擴增酶。

5.如權利要求4所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：PCR反應組分中各組分的含量為雙蒸水5.7μL、10×PCR緩沖液1μL、脫氧核苷1.5μL、5U/μL PCR擴增酶0.2μL、10pmol/μL上游引物0.3μL、10pmol/μL下游引物0.3μL、DNA模板1μL；PCR反應程序為A-95℃處理5min、B-95℃處理30sec、C-57℃處理40sec、D-72℃處理1min、E-72℃處理3min、F-4℃處理不小于30min，其中B、C、D循環45次。

6.如權利要求2所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：步驟5中SAP的反應組分為去RNA酶雙蒸水、SAP酶以及PCR產物。

7.如權利要求6所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：SAP的反應組分各組分的含量為去RNA酶雙蒸水2μL、SAP酶0.5μL以及PCR產物4.5μL，SAP反應程序為37℃處理25min、85℃處理5min、4℃處理不小于30min。

8.如權利要求2所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：步驟6中T切/RNase A消化反應的反應組分為去RNA酶雙蒸水、5×T7聚合酶緩沖液、T裂解混合液、二硫蘇糖醇、T7 RNADNA聚合酶、核糖核酸酶以及PCR/SAP混合物。

9.如權利要求8所述的MT2基因啟動子區甲基化的檢測方法，其特征在于：T切/RNase A消化反應的反應組分中各組分的含量為去RNA酶雙蒸水3.20μL、5×T7聚合酶緩沖液0.89μL、T裂解混合液0.21μL、100mM二硫蘇糖醇0.23μL、T7 RNADNA聚合酶0.42μL、核糖核酸酶0.05μL以及PCR/SAP混合物2.00μL。

10.一種MT2基因啟動子區甲基化檢測方法的應用于預測患者是否患有抑郁癥以及檢測抑郁癥患者患病程度。