[發明專利]一種彈性蛋白及其合成方法

在審

• 申請號: 202010109173.2
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111171139A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 吳狄雄;沈曉霞
• 申請（專利權）人: 海南美肽生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 廣州文衡知識產權代理事務所(普通合伙) 44535
• 代理人: 池學化

1.一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：以牛心脈為原料，選用彈性蛋白酶對其水解，定向剪切技術生產的以肽類為主的膠原蛋白肽，包括以下步驟:

步驟一：原料的選用：

首先采用牛心脈為原料，當天宰殺的牛心脈，清洗備用，確保原料的新鮮；

步驟二：提膠操作：

膠原受熱水作用,使膠原大分子的多級結構逐漸降解成三聯螺旋體,而三聯螺旋體繼續解旋和降解,形成α、β、γ,以及其他大分子蛋白；

步驟三：澄清：

首先對其水源進行過濾，保證水源的干凈無雜質，蛋白酶酶解后的膠原蛋白多肽溶液一般含有很多不溶物，直接過濾速度較慢，如果加入絮凝劑使其中的不溶成分快速絮凝沉降，那么將提高過濾速度和過濾質量，選擇殼聚糖作為絮凝劑，是由于其來自于天然產物，操作步驟簡單、沒有毒副作用、達到絮凝效果后能夠完全除去、不影響最終產品質量，所形成的絮凝沉淀能夠保持很長一段時間，即使輕微攪動也不會被打散；

步驟四：棉餅過濾：

首先調試棉餅過濾機，啟動后將其澄清后的溶液進行過濾處理；

步驟五：脫鹽：

利用離子交換膜技術，通過陽離子膜使海水中的陽離子交換為銨離子，通過陰離子膜使海水中的陰離子交換為碳酸根離子，此時海水中的鹽轉化為可以揮發析出的碳酸銨，采用減壓揮發和/或催化分解揮發析出碳酸銨，間接地實現脫鹽；

步驟六：酶解：

酶法除雜是分離精制的新方法，此方法是根據天然物提取液中雜質的種類、性質，有針對性地采用相應的酶，將這些雜質分解或除去，以改善液體產品的澄清度，提高產品的穩定性；

步驟七：脫色：

采用氧化劑將其氧化脫色，投加氯、臭氧等進行水的脫色處理，有時投加混凝劑也可進行水的脫色處理；

步驟八：精濾：

微濾膜是用纖維素或高分子材料制成的，孔徑一般為20納米至十幾微米，能夠濾除微米級(1微米＝10負6次米)或納米級(1納米＝10負9次米)的雜質微粒和大多數細菌，常用的微濾膜有醋酸纖維素濾膜、混合纖維酯濾膜，硝酸纖維素濾膜、聚酰胺濾膜及聚四氟乙烯濾膜等；

步驟九：納濾：

調節到合適的納濾膜兩側壓力比，納濾膜的分離機理為篩分和溶解擴散并存，同時又具有電荷排斥效應，可以有效地去除二價和多價離子、去除分子量大于200的各類物質，可部分去除單價離子和分子量低于200的物質，納濾膜的分離性能明顯優于超濾和微濾，而與反滲透膜相比具有部分去除單價離子；

步驟十：濃縮：

通過加熱膠原，膠原濃縮整體的水分，達到合適的一定濃度，從而實現膠原蛋白的聚集；

步驟十一：除菌過濾：

在尼龍膜微孔折疊濾芯精密過濾器過濾，百級層流下灌裝即得；

步驟十二：噴霧干燥：

采用霧化干燥試劑，噴灑，充分吸收空氣中懸浮的水汽，從而實現內部干燥；

步驟十三：內包裝：

采用罐體與瓶體進行劑量包裝，保證瓶口干燥，沒有殘留，確保包裝內部的密封；

步驟十四：金屬檢測：

金屬檢測采用GAP認證、美國FDA認證、歐盟認證，保證了產品藥殘、重金屬的安全性；

步驟十五：外包：

采用防護泡沫體，對其罐體的外表面進行保護，以免運輸過程中發生碰撞造成皮損。

2.根據權利要求1所述的一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：針對與牛心脈的原料，進行殘藥檢測、激素檢測，通過GAP認證、美國FDA認證、歐盟認證，保證了產品藥殘、重金屬的安全性，確保原料的安全可靠，保證原料的可追溯性。

3.根據權利要求1所述的一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：步驟六酶解控制最適pH值4～5，最佳作用溫度40～60℃。

4.根據權利要求1所述的一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：精密過濾器過濾精度為0.22μm，制備的膠原完全可以達到產品無菌要求。

5.根據權利要求1所述的一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：步驟七的脫色步驟，投入的氯、臭氧與膠原體的比例為1:25。

6.根據權利要求1所述的一種彈性蛋白及其合成方法，其特征在于：濃縮的溫度控制在80攝氏度至90攝氏度，溫度從80攝氏度不斷的提高。