[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學(xué)檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010108629.3
• 申請(qǐng)日: 2020-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN111189900B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李燦鵬;趙卉;張亞平;劉鳳;謝偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6825
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 段和香

本發(fā)明涉及一種新型冠狀病毒2019?nCoV的電化學(xué)檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法包括針對(duì)新型冠狀病毒2019?nCoV RNA序列中兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?yàn)榘袠?biāo)的三個(gè)探針設(shè)計(jì)、三種物質(zhì)的制備和電化學(xué)傳感器的構(gòu)建。本發(fā)明針對(duì)新型冠狀病毒2019?nCoV的電化學(xué)檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速/準(zhǔn)確、低成本的顯著優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是屬于針對(duì)新型冠狀病毒(2019-nCoV)電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒(2019-nCoV)是一種以前尚未在人類中發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒，可以通過飛沫、氣溶膠、接觸等方式傳播，會(huì)引起從普通感冒到重癥肺炎的各種癥狀，有較高的傳染性和危害性。目前，2019-nCoV的常規(guī)檢測(cè)方法基本上是熒光PCR法，但該方法存在設(shè)備昂貴、耗時(shí)、維護(hù)成本高、檢測(cè)靈敏度不高等問題。電化學(xué)法具有高效、快速、靈敏、廉價(jià)等優(yōu)點(diǎn)，然而目前關(guān)于電化學(xué)檢測(cè)2019-nCoV的研究還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種便捷、高檢測(cè)靈敏度和無需高價(jià)儀器即能開展檢測(cè)2019-nCoV的方法。本發(fā)明用于基于探針識(shí)別技術(shù)檢測(cè)人源新型冠狀病毒(2019-nCoV)的RNA。本發(fā)明針對(duì)新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學(xué)檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速/準(zhǔn)確、低成本的顯著優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。

一種新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學(xué)檢測(cè)方法，其步驟如下：

(1)四氧化三鐵(Fe₃O₄)納米微球的制備

把三氯化鐵水合物加入到乙二醇中形成澄清溶液，并加入乙酸鈉和聚乙二醇，攪拌30～60分鐘后，放入水熱反應(yīng)釜中加熱反應(yīng)，冷卻到室溫后得黑色沉淀，用無水乙醇洗滌沉淀，干燥后得到Fe₃O₄納米微球；

其中所述三氯化鐵在乙二醇中的質(zhì)量體積濃度為0.2％～0.5％，水熱反應(yīng)是在120～220℃下反應(yīng)5～10小時(shí)，干燥是在60～100℃下處理6～10小時(shí)，乙酸鈉與三氯化鐵的質(zhì)量比為3～6:1，聚乙二醇與三氯化鐵的質(zhì)量比為1:2～3:1；

(2)金納米粒子負(fù)載Fe₃O₄納米復(fù)合物(Au@Fe₃O₄)的制備

將步驟(1)Fe₃O₄納米微球分散于超純水中，超聲分散均勻后，依次加聚乙二醇400、檸檬酸三鈉、氯金酸和抗壞血酸，攪拌，用磁鐵分離后得到黑色沉淀，用無水乙醇洗滌后得到Au@Fe₃O₄復(fù)合物；

所述聚乙二醇400、檸檬酸三鈉、氯金酸、抗壞血酸的在超純水中的濃度分別為0.10～0.25mg/mL、1～5mg/mL、2～6mg/mL、1～6mg/mL；

(3)金納米粒子/磺酸化杯[8]芳烴/還原氧化石墨烯/電信號(hào)物質(zhì)復(fù)合物(Au@RGO-SCX8@MB)的制備

將4-磺酸杯[8]芳烴水合物(SCX8)、氧化石墨烯(RGO)分散到去離子水中，超聲后調(diào)節(jié)pH值為7.0～12.0，回流反應(yīng)后，離心，棄去上清液，固體用去離子水洗滌3～4次，得到還原的氧化石墨烯-SCX8復(fù)合物(RGO-SCX8)；將RGO-SCX8復(fù)合物分散于去離子水中，超聲分散均勻后加入HAuCl₄，攪拌、離心分離后棄去上清液，固體用去離子水洗滌，得到Au@RGO-SCX8復(fù)合物；把Au@RGO-SCX8復(fù)合物超聲分散于去離子水中，然后加入電信號(hào)物質(zhì)，攪拌，離心分離得到沉淀，用去離子水洗滌沉淀，最后得到Au@RGO-SCX8-電信號(hào)物質(zhì)復(fù)合物；