[發明專利]一種新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學檢測方法

有效

• 申請號: 202010108629.3
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111189900B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 李燦鵬;趙卉;張亞平;劉鳳;謝偉
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6825
• 代理公司: 成都市鼎宏恒業知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 51248
• 代理人: 段和香

1.一種新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括針對新型冠狀病毒2019-nCoV RNA序列中ORF1ab結構域為靶標的三個探針：捕獲探針 Captureprobe, CP、標簽信號探針Labeled signal probe, LP和輔助探針Auxiliary probe, AP；其中：

CP：5' - ACCTTTCCACATACCGCAGACG - 3'；

LP：5' - TCGAGTTACGCTAAGCGCGGAGTTGATCACAACTA- 3'；

AP：5' - CTTAGCGTAACTCGA-TAGTTGTGATCAACTCCGCG - 3'；

該檢測方法包括針對新型冠狀病毒2019-nCoV RNA序列中N結構域為靶標的三個探針：捕獲探針 Capture probe, CP、標簽信號探針Labeled signal probe, LP和輔助探針Auxiliary probe, AP；其中：

CP：5' - CAATCTGTCAAGCAGCAGCA - 3'；

LP：5' - TCGAGTTACGCTAAG AGACATTTTGCTCTCAAGCT - 3'；

AP：5' -CTTAGCGTAACTCGAAGCTTGAGAGCAAAATGTCT- 3'；

該方法包括以下物質：Fe₃O₄納米微球、金納米粒子負載Fe₃O₄納米復合物：Au@Fe₃O₄復合物、金納米粒子/磺酸化杯[8]芳烴/還原氧化石墨烯/電信號物質復合物：Au@RGO-SCX8-電信號物質復合物；

該檢測方法包括電化學傳感器的構建，其步驟為：將Au@Fe₃O₄復合物超聲分散在緩沖液Ⅰ中，并加入捕獲探針，在4℃的條件下放置5~20小時，磁鐵分離；然后將固體加入緩沖液Ⅰ和己硫醇，己硫醇用來封閉非特異性位點，室溫放置10~40 min后，用磁鐵分離，在分離后固體中加入緩沖液Ⅱ和目標RNA；室溫下放置1~2小時后磁鐵分離，在分離的固體中依次加入信號探針、輔助探針和Au@RGO-SCX8-電信號物質復合物分散液，室溫下放置1~2小時后磁鐵分離，將固體分散在磷酸緩沖液中，取分散液滴于絲網印刷電極表面，并在電化學工作站上用示差脈沖伏安法、循環伏安法或交流伏安法確定目標RNA的濃度和峰電流的關系，并獲得電流強度與RNA濃度的標準曲線，進而完成電化學傳感器的構建；

所述磷酸緩沖液pH為7.2；

所述的檢測方法為，使用該標準曲線計算待測樣品中新型冠狀病毒2019-nCoV中RNA的濃度，并根據該結果來評價待檢樣本中是否存在2019-nCoV，從而判斷是否被病毒感染。

2.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學檢測方法，其特征在于，所述捕獲探針Capture probe, CP和標簽信號探針Labeled signal probe, LP的3’端使用巰基修飾。

3.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學檢測方法，其特征在于，所述的Fe₃O₄納米微球的制備方法為：把三氯化鐵水合物加入到乙二醇中形成澄清溶液，并加入乙酸鈉和聚乙二醇，攪拌30~60分鐘后，放入水熱反應釜中加熱反應，冷卻到室溫后得黑色沉淀，用無水乙醇洗滌沉淀，干燥后得到Fe₃O₄納米微球。

4.根據權利要求3所述的新型冠狀病毒2019-nCoV的電化學檢測方法，其特征在于，所述的Fe₃O₄納米微球的制備方法包含以下參數：其中所述三氯化鐵水合物在乙二醇中的質量體積濃度為0.2%~0.5%，水熱反應是在120~220℃下反應5~10小時，干燥是在60~100℃下處理6~10小時，乙酸鈉與三氯化鐵的質量比為3~6:1，聚乙二醇與三氯化鐵的質量比為1:2~3:1。