[發(fā)明專利]一種肝纖維化抗體蛋白芯片的制備以及在診斷纖維化分期中的應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111337684A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周洋;王凱;張書源;張子謙
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/552
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

本發(fā)明公開了肝纖維化抗體蛋白芯片的制備以及在診斷纖維化分期中的應(yīng)用，包括不同病因肝纖維化患者血清生物標(biāo)志物的樣本庫建立、敏感度和特異度較高的生物標(biāo)志物篩選、肝組織活檢分期的抗體蛋白芯片制備以及肝纖維化標(biāo)志物蛋白抗體芯片檢測系統(tǒng)、應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。采用本發(fā)明只需采取患者的外周血就可以快速高效的檢測出肝纖維化的病因，降低了檢測成本并且縮短了檢測時間，減少了肝臟病變活檢的需要，降低了取樣難度并且減輕了因取樣給患者帶來的痛苦。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種肝纖維化抗體蛋白芯片的制備以及在診斷纖維化分期中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝纖維化是多種慢性肝病共同歸宿，活檢是公認(rèn)的臨床診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”。但由于其有創(chuàng)性以及相關(guān)并發(fā)癥，血清學(xué)標(biāo)志物的檢測更具吸引力。目前已發(fā)現(xiàn)多種肝纖維化的生物標(biāo)志物以及預(yù)測模型，然而各種單一的生物標(biāo)志物和聯(lián)合評分系統(tǒng)對不同病因?qū)е碌睦w維化有偏向，同時敏感度和特異度各有優(yōu)劣，為臨床工作增加困難。因此，建立不同病因肝纖維化患者血液生物標(biāo)志物的樣本庫，篩選出敏感度特異度較高的生物標(biāo)志物，制備具有商業(yè)化潛能的抗體蛋白芯片，并能對應(yīng)肝組織活檢分期，將減少患者痛苦，更好地指導(dǎo)臨床醫(yī)師合理診治肝纖維化，同時為肝纖維化的研究提供更多數(shù)據(jù)與資源。

肝纖維化診斷及治療共識(2019年)共識與指南中推薦臨床上肝纖維化的病理學(xué)診斷采用Scheuer評分系統(tǒng)：Scheuer評分系統(tǒng)將肝纖維化分為0～4期。0期-無纖維化；1期-門管區(qū)擴大；2期-門管區(qū)纖維化，纖維間隔形成；3期-纖維間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂；4期-可能或肯定肝硬化

抗體芯片技術(shù)作為一種通量化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)，已經(jīng)用于疾病蛋白質(zhì)組的研究，并能夠較全面和準(zhǔn)確地反映出在疾病發(fā)生發(fā)展過程中的蛋白質(zhì)表達水平的變化。

目前無大規(guī)模不同病因肝纖維化患者血清樣本庫，尚缺乏血清特異性肝纖維化診斷指標(biāo)，同時單一血液指標(biāo)對肝纖維化評估作用有限。并且無血清標(biāo)志物模型對應(yīng)肝組織活檢分期。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于建立不同病因肝纖維化患者血清生物標(biāo)志物的樣本庫，其特點在于能夠全面的反應(yīng)各種肝纖維化患者的血清標(biāo)志物。

本發(fā)明的另一目的是利用篩選的敏感度、特異度較高的生物標(biāo)志物制備出檢測肝纖維化抗體蛋白芯片。其特點是能夠快速高效的顯示肝纖維化原因。

本發(fā)明還有一目的是利用肝纖維化抗體蛋白芯片的結(jié)果建立評分(Scheuer)系統(tǒng)對肝組織活檢進行分期。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。

1.建立不同病因肝纖維化患者血清生物標(biāo)志物的樣本庫

在全國各省市有代表性的多家醫(yī)院，患者知情同意，醫(yī)院倫理審查通過的前提下，收集三年內(nèi)肝臟穿刺活檢并確診為肝纖維化患者以及100例健康志愿者(肝功正常、肝炎病毒陰性、肝臟影像學(xué)無異常)的血液樣本，建立樣本庫。根據(jù)臨床資料和診療經(jīng)過盡可能將患者分為慢性乙型肝炎(CHB)、慢性丙型肝炎(CHC)、酒精性肝病(ALD)、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、肝硬化(LC)。同時將入組患者和健康志愿者的全部醫(yī)療信息進行網(wǎng)絡(luò)登記，統(tǒng)一管理。

2.篩選出敏感度特異度較高的生物標(biāo)志物