[發明專利]基于金屬標記的阿爾茲海默癥腦組織Aβ蛋白的原位檢測方法

有效

• 申請號: 202010105730.3
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111393524B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 高雪;羅施中;馮流星
• 申請（專利權）人: 北京化工大學;中國計量科學研究院
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/532;G01N33/68
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 牛艷玲

1.一種非診斷目的的離體腦組織中Aβ蛋白的定量檢測方法，該方法包括以下步驟：

(1)取離體腦組織，進行勻漿、冰凍切片；

(2)配制不同濃度的雙(2,2'-聯吡啶)-4'-甲基-4-羧基聯吡啶-釕N-琥珀酰亞胺酯-雙-(六氟磷酸鹽)的標準溶液，溶劑選自DMSO、甲醇中的一種或兩種的任意比例的混合物；

(3)將步驟(1)得到的腦組織切片反復浸泡在步驟(2)得到的不同濃度的雙(2,2'-聯吡啶)-4'-甲基-4-羧基聯吡啶-釕N-琥珀酰亞胺酯-雙-(六氟磷酸鹽)的標準溶液中并晾干；

(4)用LA-ICP-MS檢測步驟(3)所得腦組織切片的Ru信號；

(5)將步驟(3)所得腦組織切片中的腦組織刮下，稱重，用硝酸消解，用ICP-MS對所得溶液中的Ru進行測定，并根據重量得到Ru的濃度；

(6)用步驟(4)及(5)所得數據制作標準曲線，其中橫坐標為步驟(5)得到的Ru的濃度，縱坐標為步驟(4)得到的Ru的信號強度；

(7)用雙(2,2'-聯吡啶)-4'-甲基-4-羧基聯吡啶-釕N-琥珀酰亞胺酯-雙-(六氟磷酸鹽)和Aβ抗體耦聯形成的螯合物對腦組織切片上的Aβ進行成像，或者進一步根據多個腦組織切片的數據對腦組織中的Aβ進行成像；

(8)根據步驟(7)所用螯合物中雙(2,2'-聯吡啶)-4'-甲基-4-羧基聯吡啶-釕N-琥珀酰亞胺酯-雙-(六氟磷酸鹽)和Aβ抗體的摩爾比，以及步驟(6)標準曲線所給出Ru的濃度與信號強度之間的關系，基于步驟(7)得到的腦組織切片Aβ成像圖或腦組織Aβ成像圖得到相應的Aβ定量圖。

2.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，腦組織切片的厚度為10μm。

3.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，每浸泡5min取出晾干，重復6次。

4.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(4)中，檢測¹⁰²Ru信號。

5.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(4)中，采用¹³C信號均一化消除腦組織切片薄厚不均的影響。

6.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(7)中，螯合物中雙(2,2'-聯吡啶)-4'-甲基-4-羧基聯吡啶-釕N-琥珀酰亞胺酯-雙-(六氟磷酸鹽)和Aβ抗體的摩爾比為50:1-500:1。

7.根據權利要求6所述的定量檢測方法，其特征在于，所述摩爾比為500:1。

8.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(7)中，所述Aβ抗體來自于哺乳動物。

9.根據權利要求8所述的定量檢測方法，其特征在于，所述哺乳動物選自人、小鼠、兔、山羊。

10.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(7)中，所述Aβ抗體能夠與哺乳動物Aβ蛋白結合。

11.根據權利要求10所述的定量檢測方法，其特征在于，所述哺乳動物選自人、小鼠、兔、山羊。

12.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(7)中，所述Aβ抗體能夠與β淀粉樣前體蛋白、Aβ_1-40、Aβ_1-42中的一種或多種結合。

13.根據權利要求12所述的定量檢測方法，其特征在于，所述Aβ抗體能夠與Aβ_1-42結合。

14.根據權利要求1所述的定量檢測方法，其特征在于，步驟(7)中，所述Aβ抗體為單克隆抗體。