[發(fā)明專利]SCD基因敲除的豬胎兒成纖維細(xì)胞系及其構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010104600.8
• 申請(qǐng)日: 2020-02-20
• 公開（公告）號(hào): CN111363743B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王彥芳;劉璐璐;王煜;陶聰;梁小娟;劉嘉莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10;C12N15/11;C12Q1/6888;A01K67/027
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.CRISPR/Cas9介導(dǎo)的SCD基因敲除的豬胎兒成纖維細(xì)胞系的構(gòu)建方法，其特征在于，其是根據(jù)豬SCD基因序列，設(shè)計(jì)并合成靶向豬SCD基因的sgRNA，然后構(gòu)建含有所述sgRNA的CRISPR/Cas9打靶載體，轉(zhuǎn)入豬胎兒成纖維細(xì)胞中，獲得SCD基因敲除的豬胎兒成纖維細(xì)胞；

其中，sgRNA作用位點(diǎn)位于豬SCD基因的2號(hào)外顯子上，sgRNA作用位點(diǎn)的核酸序列分別如SEQ ID NO:1和4所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述打靶載體是將編碼sgRNA的雙鏈DNA序列分別構(gòu)建到含有U6啟動(dòng)子和Cas9蛋白的載體上得到的。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，用于構(gòu)建打靶載體的骨架載體為Cas9/gRNA(puro-GFP)Vector。

4.靶向編輯豬SCD基因的CRISPR/Cas9系統(tǒng)在調(diào)控細(xì)胞中脂肪合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子、脂合成相關(guān)基因以及甘油三酯和游離脂肪酸含量中的應(yīng)用，其中，所述調(diào)控為脂合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子和脂合成相關(guān)基因表達(dá)量降低，甘油三酯和游離脂肪酸含量降低；

所述CRISPR/Cas9系統(tǒng)中靶向豬SCD基因的sgRNA，其作用位點(diǎn)的核酸序列分別如SEQID NO:1和4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脂肪合成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子選自SREBP-1C、PPARG和C/EBPA；和/或

所述脂合成相關(guān)基因選自FASN、ELOVL6、FADS2、DGAT1、DGAT2、FABP4和ACACA。