[發明專利]一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法

在審

• 申請號: 202010104382.8
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111154700A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 方曙光;王濤;龔谷迪;汪欣;朱建國
• 申請（專利權）人: 江蘇微康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/225
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 周超

本發明公開了一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法，涉及微生物制備技術領域，所述德氏乳桿菌保加利亞亞種命名為德氏乳桿菌保加利亞亞種Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus，保藏編號為CGMCC No.15751。通過本發明的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法制得的菌粉得率可提高1.2?1.5倍，活菌數可提高1.5?2倍；且制備過程中所需的培養基配比簡單，能進一步降低所需原料的成本。

技術領域

本發明涉及微生物制備技術領域，特別涉及一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法。

背景技術

德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)，又稱保加利亞乳桿菌，是乳制品生產重要的的重要乳酸菌，可以人體增強免疫及降血脂、抗腫瘤等重要的生理功能，同時在食品發酵、工業乳酸發酵、飼料行業、基因工程和醫療保健等領域有著較為廣泛的應用。

目前微生物發酵技術可進行保加利亞乳桿菌大規模工業化生產，即經過多級種子過增至大型發酵罐進行培養得到菌體，工業化生產菌株培養基多以MRS培養基為基礎進行穩定擴大生產。專利號為201210470652.2的發明專利公布了以乳糖、牛血清等為主要原料的培養基；專利號為201410171964.2的發明專利公布了以薏苡仁和山藥混合多糖提取物為主的保護劑生產方法來提高活菌數。然而相對于其他乳酸菌，現有的，使用保加利亞乳桿菌菌株進行生產的方式都難以提高菌體得率及活菌數，且生產過程繁瑣。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法，解決現有的使用保加利亞乳桿菌菌株進行生產的方式都難以提高菌體得率及活菌數，且生產過程繁瑣的問題。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案為：

一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種，所述德氏乳桿菌保加利亞亞種命名為德氏乳桿菌保加利亞亞種Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus，保藏編號為CGMCCNo.15751。

一種所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，包括如下步驟：

(1)將德氏乳桿菌保加利亞亞種原始種子接種至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到一級種子；

(2)將所述一級種子轉接至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到二級種子；

(3)將所述二級種子轉接至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到三級種子；

(4)將三級種子接種至發酵培養基進行發酵，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為12-16小時，OD600值為7-10，得到發酵液；

(5)將所述發酵液進行離心，離心轉速為10000-15000，棄去上清后得到菌泥；

(6)向所述菌泥中加入冷凍保護劑，菌泥與冷凍保護劑的質量比為1：1-1：2，進行凍干，冷凍干燥時間為24-36小時。

優選的，所述液體培養基為將如下質量分數原料：乳糖1％-3％，牛肉浸粉0.5％-2％，蛋白胨0.5-1.5％，酵母膏0.5-1.5％，磷酸氫二鉀0.2-0.5％，檸檬酸氫二銨0.2-0.5％，硫酸鎂 0.02-0.05％，吐溫80 0.05％-0.1％，其余為純水混合后118℃滅菌15-20分鐘后調節pH為 6.5-6.8制備得到。

優選的，種子在轉接的過程中需要在對流的無菌凈化臺中進行。