[發明專利]一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種及其制備方法

在審

• 申請號: 202010104382.8
• 申請日: 2020-02-20
• 公開（公告）號: CN111154700A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 方曙光;王濤;龔谷迪;汪欣;朱建國
• 申請（專利權）人: 江蘇微康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/225
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 周超

1.一種高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種，其特征在于：所述德氏乳桿菌保加利亞亞種命名為德氏乳桿菌保加利亞亞種Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus，保藏編號為CGMCC No.15751。

2.一種如權利要求1所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將德氏乳桿菌保加利亞亞種原始種子接種至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到一級種子；

(2)將所述一級種子轉接至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到二級種子；

(3)將所述二級種子轉接至具有5-10ml液體培養基的試管中，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為10-15小時，OD600值為6-8，得到三級種子；

(4)將三級種子接種至發酵培養基進行發酵，接種量為1-3％，培養溫度為30-37℃，培養時間為12-16小時，OD600值為7-10，得到發酵液；

(5)將所述發酵液進行離心，離心轉速為10000-15000，棄去上清后得到菌泥；

(6)向所述菌泥中加入冷凍保護劑，菌泥與冷凍保護劑的質量比為1：1-1：2，進行凍干，冷凍干燥時間為24-36小時。

3.根據權利要求2所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：所述液體培養基為將如下質量分數原料：乳糖1％-3％，牛肉浸粉0.5％-2％，蛋白胨0.5-1.5％，酵母膏0.5-1.5％，磷酸氫二鉀0.2-0.5％，檸檬酸氫二銨0.2-0.5％，硫酸鎂0.02-0.05％，吐溫80 0.05％-0.1％，其余為純水混合后118℃滅菌15-20分鐘后調節pH為6.5-6.8制備得到。

4.根據權利要求2所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：種子在轉接的過程中需要在對流的無菌凈化臺中進行。

5.根據權利要求2所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：所述發酵培養基為將如下質量分數原料：蔗糖2％-4％，牛肉浸粉0.5％-2％，酵母膏0.5-1.5％，磷酸氫二鉀0.2-0.5％，檸檬酸氫二銨0.2-0.5％，硫酸鎂0.02-0.05％，吐溫800.05％-0.1％，其余為純水，混合后118℃滅菌15-20分鐘，調節pH為6.5-6.8后制備得到。

6.根據權利要求2所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：步驟(4)發酵過程控制pH為5.5-5.8。

7.根據權利要求2所述的高產的德氏乳桿菌保加利亞亞種的制備方法，其特征在于：步驟(6)中所述冷凍保護劑包括如下重量份原料：海藻糖5-8份，甘油10-12份，酵母粉2-5份和脫脂奶粉5-8份。