[發明專利]新型冠狀病毒檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010099657.3
• 申請日: 2020-02-18
• 公開（公告）號: CN111187858A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 楊正林;楊文秀;石毅;蔣黎;龍騰鑲;楊達梅;文春描;占明明
• 申請（專利權）人: 四川省醫學科學院(四川省人民醫院);邁克生物股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種新型冠狀病毒檢測試劑盒。所述試劑盒包括qRT?PCR反應液、qRT?PCR酶液、內標、陰性質控品和陽性質控品；所述內標為含有內參檢測基因片段的RNA假病毒；所述陽性質控品為含有目的檢測基因片段的RNA假病毒；所述qRT?PCR反應液中包括序列為SEQ ID NO:1～8的四組上下游引物和序列為SEQ ID NO:9～12四條探針；該試劑盒可同時檢測三段目標基因片段，因此可有效避免漏檢，并且試劑盒的內標和陽性質控品均使用假病毒，可有效提高試劑盒制備的安全性，并且還能進一步保證試劑盒檢測準確性；此外，本試劑盒靈敏度高、穩定性好。

技術領域

本發明屬于體外核酸檢測領域，本發明提供了一種用于檢測臨床樣本中 新型冠狀病毒(2019-nCoV)的熒光RT-PCR檢測試劑盒；可用于新型冠狀 病毒的臨床早期定性診斷。

背景技術

冠狀病毒是自然界廣泛存在的一個大型病毒家族，因其形態在電鏡下觀 察似王冠而得名，主要引起呼吸系統疾病。2020年2月11日，世界衛生組 織(WHO)宣布，將把從2019年12月開始出現的新型冠狀病毒肺炎，正式 命名為“COVID-19”，全稱CoronavirusDisease 2019。感染新型冠狀病毒后， 患者初始癥狀多為發熱、乏力、干咳，并逐漸出現重癥表現，部分嚴重病例 可出現急性呼吸窘迫綜合征或膿毒性休克，甚至死亡。該病暫時沒有特效治 療方法。

2020年1月30日，WHO宣布將2019-nCoV疫情列為“國際關注公共衛 生突發事件”(Public Health Emergency of International Concern，PHEIC)，至 2020年2月4日，全球總共有24個國家累計報告新型冠狀病毒確診病例 20502例。該病毒主要通過飛沫傳播，接觸沾染有含病毒飛沫的物品和材料 也可被感染。繼美國報道新冠狀肺炎病人糞便中可檢出2019-nCoV核酸，武 漢和深圳也發現類似情況，提示了該病毒通過糞-口途徑消化道感染的可能 性，人群對2019-nCoV普遍易感，兒童也可感染。潛伏期或/和無癥狀2019- nCoV感染者是新冠肺炎的主要傳染源。

2019-nCoV的形態結構為圓形或橢圓形，常為多形性，直徑在60～140nm， 基因組為單正鏈RNA，有包膜，包膜上有蘑菇狀蛋白刺突使病毒體形如王冠 狀。2020年1月24日，中國疾病預防控制中心公布了2019-nCoV電鏡照片 (參見圖1)。

實時熒光PCR技術，通過引入特異性探針和熒光信號的動態監測使PCR 產物的擴增及分析的全過程可以在單管內封閉完成，并且可以對PCR擴增 產物進行實時動態監測及自動分析結果，具有實時、準確、特異、快速、簡 便、廉價等特點，是一種先進的分子檢測技術。

目前的新型冠狀病毒檢測試劑盒，因研發周期短、樣本收集不規范等問 題，普遍存在檢測假陰性高，容易漏檢的問題；并且檢測試劑盒的安全性也 是亟需解決的另一個問題。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種新型冠狀病毒(2019-nCoV)的熒 光RT-PCR檢測試劑盒；該試劑盒是針對三個目標基因片段進行的同時檢測， 避免漏檢的同時，檢測靈明度高；并且本試劑盒還使用假病毒作為內標和陽 性對照，可以有效保證試劑盒檢測的準確性，其高試劑盒制備研發過程中的 安全性能；此外本發明試劑盒的穩定性也較好。

在一方面，本發明一種冠狀病毒檢測試劑盒，所述試劑盒包括qRT-PCR 反應液、qRT-PCR酶液、內標、陰性質控品和陽性質控品；

所述內標為含有內參檢測基因片段的RNA假病毒；所述陽性質控品為 含有目的檢測基因片段的RNA假病毒；

所述qRT-PCR反應液中包括序列為SEQ ID NO:1～8的引物和序列為 SEQ ID NO:9～12探針。

在一些實施方式中，所述目的檢測基因片段為從2019-nCoV病毒的 ORF1ab基因、N基因和E基因中各選取150～400bp的基因片段組合而成。